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Lec1(卵巢細胞)
稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為 0.25%,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調 PH到 7.2左右)或 PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于 4℃內過夜。
用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器(0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌。然后分裝成小瓶于-20℃保存以備使用。
青、鏈霉素溶液的配制于消毒
1. 所用純凈水(雙蒸水)需要 15 磅高壓 20 分鐘滅菌。
2.具體操作均在超凈臺內完成。青霉素是 80 萬單位/瓶,用注射器加 4ml滅菌雙蒸水。鏈霉素是100萬單位/瓶,加5ml 滅菌雙蒸水,即每毫升各為 20 萬單位。
3.使用時溶入培養液中,使青鏈霉素的濃度zui終為 100 單位/ml。1單位=1 微克.
RPMI1640 的制備與消毒:
1.溶解、調 PH 值、定容:先將培養基粉劑加入培養液體積 2/3 的雙蒸水中,并用雙蒸水沖洗包裝袋 2-3 次(沖洗液一并加入培養基中),充分攪拌至粉劑全部溶解,并按照包裝說明添加一定的藥品.然后用注射器向培養基中加入配制好的青鏈霉素液各0.5ml, 使青鏈霉素的濃度zui終各為100單位/ml。然后用一個當量的鹽酸和NaOH調 PH到 7.2 左右。zui后定容至1000ml,搖勻。
2.安裝蔡式濾器:安裝時先裝好支架,按規定放好濾膜,用螺絲將不銹鋼濾器和支架連接好。然后卸下支架腿分別用布包好待消毒。
3.抽濾:配制好的培養液通常用濾器過濾除菌。通常用蔡式濾器在超凈工作臺內過濾。
4.分裝:將過濾好的培養液分裝入小瓶內置于 4℃冰箱內待用。 5.使用前要向100ml培養液中加入1ml 谷氨酰胺溶液(4℃時兩周有效)。
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