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蛋白質及多肽合成
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單克隆抗體和多克隆抗體有什么區別?
抗原上那部分可以引起機體產生抗體的分子結構,叫做抗原決定簇。一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇,因而使機體產生好幾種不同的抗體,zui終產生出抗體是漿細胞。只針對一個抗原決定簇起作用的漿細胞群就是一個純系,純系的英文為Clone,音譯就是克隆。
由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就象導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。
標記抗體:
抗體經過酶標記、鐵蛋白標記或通過膠體金標記獲得標記抗體,是免疫電鏡樣品制備的一種方法,用于觀察抗原抗體免疫復合物方面研究的手段。
蛋白質與多肽的:
多肽:通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,道爾頓),能透過半透膜,不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質。
蛋白質:生物體中廣泛存在的一類生物大分子,由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,經翻譯后加工而生成的具有特定立體結構的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結合形成一條多肽鏈,再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結合合而成的高分子化合物。
就是:都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質的區別:
蛋白質的結構層次可簡寫為:C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽(肽鏈)→蛋白質。多肽與蛋白質是不同的兩個層次,區別如下:
①多肽和蛋白質的結構有差異。多肽僅僅是蛋白質的初級結構形式,而蛋白質具有一定的空間結構。蛋白質是由多肽和其他物質結合而成的,一個蛋白質分子可由一條肽鏈組成(如高等動物的細胞色素c是由104個氨基酸殘基的一條肽鏈組成),也可由多條肽鏈通過一定的化學鍵(肯定不是肽鍵,如二硫鍵、氫鍵等)連接而成(如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等)。
②多肽與蛋白質的功能有差異。多肽往往是無生物活性,而蛋白質是具有生物活性的。多肽一般無活性(如蛋白質在胃、小腸中經消化產生的多肽),少數有活性(如抗利尿激素就是多肽類激素),與蛋白質相比,多肽的分子量較小,沒有空間結構,一般無活性;蛋白質的分子量較大,有空間結構,有活性(變性后活性下降或消失,活性消失叫做失活)
因此,一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實際上不能稱為蛋白質。
多肽合成:
是一個重復添加氨基酸的過程,固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來,經過不斷的改進和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術,表現出了經典液相合成法*的優點,從而大大的減輕了每步產品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
抗體(antibody)
指機體的免疫系統在抗原刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。
一抗體和二抗體:
一抗是針對抗原的抗體,二抗是針對一抗的抗體。即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。
*抗體就是我們平時所說的抗體,它能和抗原特異性結合。
第二抗體是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在。
單克隆抗體:
(monoclonal antibody,McAb)克隆選擇學說:淋巴細胞在與抗原接觸前就已經存在多種多樣的與抗原專一性結合的受體,一種細胞帶一種受體,進入機體的抗原選擇性的結合其中的個別淋巴細胞,使之活化,增殖產生大量帶有同樣受體的細胞群,分泌同樣的抗體。當抗原進入體內,在機體中就會誘導出針對不同抗原決定簇的多種抗體,如果要把這些抗體一一分開,用現有的生物化學或物理化學方法是根本辦不到的。1975年科勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)將小鼠免疫細胞與腫瘤細胞融合,培養出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細胞。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年,Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學成功地從轉基因兔中獲得了骨髓瘤細胞(Plasmacytoma),開創了兔單克隆抗體技術。與鼠單抗相比,兔單抗具有:首先,兔抗血清通常含有高親和力抗體,可以比鼠抗血清識別更多種類的表位;其次,兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產生免疫的抗原;第三,由于兔脾臟較大,可以更多進行的融合試驗,使得高通量篩選融合成為可能。
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