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"Skp2 peptide??細胞S相激酶相關蛋白抗原
蛋白質及多肽合成
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zui初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分,故曾把抗體統稱為丙種(γ)球蛋白。后來發現,抗體并不都在γ區;并且位于γ區的球蛋白,也不一定都具有抗體活性。
1964年,世界衛生組織舉行專門會議,將具有抗體活性以及與抗體相關的球蛋白統稱為免疫球蛋白(Ig),如骨髓瘤蛋白,巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因而免疫球蛋白是結構化學的概念,而抗體是生物學功能的概念。可以說,幾乎所有抗體都是免疫球蛋白(極少數抗體為RNA),但并非所有免疫球蛋白都是抗體。
抗體規律:
(1)初次反應產生抗體:當抗原*次進入機體時,需經一定的潛伏期才能產生抗體,且抗體產生的量也不多,在體內維持的時間也較短。
(2)再次反應產生抗體:當相同抗原第二次進入機體后,開始時,由于原有抗體中的一部分與再次進入的抗原結合,可使原有抗體量略為降低。隨后,抗體效價迅速大量增加,可比初次反應產生的多幾倍到幾十倍,在體內留存的時間亦較長。
(3)回憶反應產生抗體:由抗原刺激機體產生的抗體,經過一定時間后可逐漸消失。此時若再次接觸抗原,可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機體的抗原與初次相同,則稱為特異性回憶反應;若與初次反應不同,則稱為非特異性回憶反應。非特異性回憶反應引起的抗體的上升是暫時性的,短時間內即很快下降。
抗體結構:
抗體是具有4條多肽鏈的對稱結構,其中2條較長、相對分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價鍵聯結形成一個由4條多肽鏈構成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種,重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。 整個抗體分子可分為恒定區和可變區兩部分。在給定的物種中,不同抗體分子的恒定區都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。可變區位于""Y""的兩臂末端。在可變區內有一小部分氨基酸殘基變化特別強烈,這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發生變異區域稱高變區。高變區位于分子表面,zui多由17個氨基酸殘基構成,少則只有2 ~ 3個。高變區氨基酸序列決定了該抗體結合抗原抗原的特異性。一個抗體分子上的兩個抗原結合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結合片段(antigen-binding fragment, Fab)。""Y""的柄部稱結晶片段(crystalline fragment,FC),糖結合在FC 上。
蛋白質與多肽的:
多肽:通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,道爾頓),能透過半透膜,不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質。
蛋白質:生物體中廣泛存在的一類生物大分子,由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,經翻譯后加工而生成的具有特定立體結構的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結合形成一條多肽鏈,再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結合合而成的高分子化合物。
就是:都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質的區別:
蛋白質的結構層次可簡寫為:C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽(肽鏈)→蛋白質。多肽與蛋白質是不同的兩個層次,區別如下:
①多肽和蛋白質的結構有差異。多肽僅僅是蛋白質的初級結構形式,而蛋白質具有一定的空間結構。蛋白質是由多肽和其他物質結合而成的,一個蛋白質分子可由一條肽鏈組成(如高等動物的細胞色素c是由104個氨基酸殘基的一條肽鏈組成),也可由多條肽鏈通過一定的化學鍵(肯定不是肽鍵,如二硫鍵、氫鍵等)連接而成(如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等)。
②多肽與蛋白質的功能有差異。多肽往往是無生物活性,而蛋白質是具有生物活性的。多肽一般無活性(如蛋白質在胃、小腸中經消化產生的多肽),少數有活性(如抗利尿激素就是多肽類激素),與蛋白質相比,多肽的分子量較小,沒有空間結構,一般無活性;蛋白質的分子量較大,有空間結構,有活性(變性后活性下降或消失,活性消失叫做失活)
因此,一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實際上不能稱為蛋白質。
多肽合成:
是一個重復添加氨基酸的過程,固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來,經過不斷的改進和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術,表現出了經典液相合成法*的優點,從而大大的減輕了每步產品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
抗體的效價鑒定:
不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應、瓊脂擴散試驗、酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
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