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在通用試劑盒系統(tǒng)的關鍵要素中,包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,做重組蛋白時,一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。就是讓大量不相關的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥通用試劑盒后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本,干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體。
②酶標記的抗原或抗體。
③酶作用的底物。
根據(jù)通用試劑盒的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。
(1) 雙抗體夾心法。
(2) 雙位點一步法。
(3) 間接法測抗體。
(4) 競爭法。
(5) 捕獲法測IgM抗體。
通用試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗。在這種方法中,通常標準配體是固定的,通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵。通過加入與受體特異性反應的抗體來定量成鍵的受體,而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量。第二種抗體能識別抗體的末端,在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應,從而使溶液顯色。
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