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下面要為大家介紹的是人ELISA試劑盒的細胞處理方法:細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養上清作為樣本。需要注意的是:因該類樣本干擾因素較多,如細胞狀態、細胞數量(大于10^6)、ph(約為7)、培養基鹽離子濃度、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。如果目的物是分泌型,主要在胞外,即可選擇細胞培養上清作為樣本,如果目的物主要存在于胞內,則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。細胞培養上清處理方法相對簡單,取細胞培養上清,1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測。
細胞裂解液:
1、貼壁細胞需要先用消化,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集)。
2、將收集到的細胞用冷PBS洗3次。
3、物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,再反復凍融):
超聲破碎:取適量PBS重懸細胞,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂。
反復凍融:將待破碎的細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復3次,使細胞溶脹破碎。
4、將標本于2-8度1500×g離心10分鐘,收集上清備用。
人ELISA試劑盒是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術,酶聯免疫吸附試驗的標準程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體,形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶標記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。
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