當前位置:上海紀寧實業有限公司>>技術文章>>ELISA試劑盒競爭法與夾心法的區別
首先將具有專一性之抗體包被(coating)于酶標板上,ELISA試劑盒檢測時加入待測樣本,樣本中若含有待測抗原,則會與酶標板上包被的抗體專一性結合,然后加入另一種針對待檢抗原的抗體,通常稱為檢測抗體,包被抗體和檢測抗體將抗原夾在中間所以叫雙抗夾心。ELISA試劑盒檢測抗體通常帶有HRP酶標記,接著加入HRP酶的底物TMB,TMB被酶催化發生顏色反應,樣本中抗原量越多則顯色越深。
因此當樣本中抗原的量越多,則HRP酶標記抗原可結合的包被抗體就越少,兩種抗原競爭結合包被抗體,所以稱為競爭法。接著加入HRP酶的底物TMB,TMB被酶催化發生顏色反應,當樣本中抗原量越多,代表酶標板孔內留下的HRP標記抗原越少,顯色也就越淺。百特純大分子Meretciel的測激素的ELISA試劑盒有些就是競爭法的。將針對小分子抗原的抗體包被在酶標板上,ELISA試劑盒檢測時加入待測樣本,使樣本中的待測抗原與酶標板上的抗體結合。然后加入HRP酶標記的抗原,此抗原也可與酶標板上的抗體結合,由于酶標板上固著的抗體數量有限,
1、檢測范圍不同
競爭法一般用于檢測無法同時與兩種抗體結合的小分子抗原;ELISA試劑盒夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。
2、檢測原理不同
競爭法的檢測原理為:受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。
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