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peprotech細胞因子使用應注意

時間:2021/1/27閱讀:750
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peprotech細胞因子中不含載體蛋白(CarrierProtein)或其他添加劑(如A、HAS或蔗糖等),并且通常以少量的鹽來進行凍干處理,因此微量的peprotech細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后,務必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現象)。

1.離心:高速離心(10,000rpm)20-30秒,或低速離心(2,000rpm)5分鐘。

2.溶解(Recotitution):用去離子水或其它緩沖液(根據說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/mL,如10ug的產品,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩,避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間,待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:

1)要求用去離子水溶解的產品,務必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;

2)要求用鹽溶液溶解的產品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。

3.分裝和貯存(AliquotandStorage):蛋白溶解后可根據自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI1640、DMEM或等溶液,其中hao含有5-10%的FCS(小牛或胎牛血清)或0.5%的A(牛血清白蛋白)來穩定蛋白。工作液在4℃可保存1周,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃(注意:不可凍存于-80℃)。分裝時每管中工作液的體積hao是一次實驗的用量,以實現每次實驗用完一只工作液,避免反復凍融引起蛋白活性的降低peprotech細胞因子中不含載體蛋白(CarrierProtein)或其他添加劑(如A、HAS或蔗糖等),并且通常以少量的鹽來進行凍干處理,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,形成很薄或不可見的蛋白層。

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