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智立中特(武漢)生物科技有限公司
質粒載體網擁有強大的包含質粒載體、細胞、微生物菌種、培養基等相關產品信息在線查詢功能,能根據不同屬性進行需求產品的篩選功能,可以在線訂購已設計入庫的質粒載體BEAS-2B人正常肺上皮細胞(STR鑒定正確)
名稱BEAS-2B(人正常肺上皮細胞)(STR鑒定正確)
別稱Beas-2B;BEAS2B;BEAS2B;Beas2B;BronchialEpitheliumtransformedwithAd12-SV402B
種屬人
年齡(性別)男性
組織來源肺;支氣管;正常;上皮;病毒轉化
生長特性貼壁細胞
細胞形態上皮細胞樣
細胞類型轉化細胞系
生物安全等級2
生長培養基DMEM+10%FBS+1%P/S
推薦傳代比例1:2-1:3
推薦換液頻率2~3次/周
凍存條件
凍存液:55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養條件
氣相:空氣,95%;CO?,5%
溫度:37℃
致瘤性No,thecellswerenottumorigenicinimmunosuppressedmice
保藏機構AddexBio;T0007001/26ATCC;CRL-9609BCRJ;0395CCTCC;GDC0139ECACC;95102433KCB;KCB200922YJKerafast;ENH021-FPNCBI_Iran;C561
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的完quan培養基)。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完quan培養基來培養細胞。收到細胞后第yi次傳代建議T25培養瓶1:2傳代。
一.培養基及培養凍存條件準備
1)準備IMDM;優質胎牛血清,20%;P/S1%。
2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%完quan培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完quan培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完quan培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
懸浮狀態下生長的細胞,可以通過向培養瓶中添加完quan培養基來維持細胞的生長狀態,一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL(不同細胞對密度要求不同,)可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完quan培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。
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