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智立中特(武漢)生物科技有限公司
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產品類別:人源細胞系
生長特性:貼壁
生長培養體系:MACOY'S5A+10%FBS;37℃,5%CO2
傳代方法:1:2傳代
細胞形態:上皮細胞樣
凍存條件:無血清細胞凍存液保存條件:95%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)
細胞英文(簡稱)U2OS;U2-OS;U-2OS(已通過STR鑒定)
細胞名稱U2OS;U2-OS;U-2OS;人骨肉瘤細胞【已通過STR鑒定】
背景資料
該細胞系(原名2T)是由PontenJ和SakselaE在1964年從一名15歲女孩的脛骨中等分化的肉瘤中分離建立的。與WI-38共培養或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的補體結合試驗(CF法)未檢測到病毒。該細胞表達胰島素樣生長因子Ⅰ、Ⅱ(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ)受體和骨肉瘤衍生生長因子(ODGF)。
細胞來源ATCCHTB-96
代次P3
規格T25
細胞數1x10^6cells
生物安全級別2
組織來源骨肉瘤
細胞形態貼壁
細胞活力95%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)
細胞檢測細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
培養條件MACOY'S5A+10%FBS;37℃,5%CO2
傳代方法建議1:2-1:3兩天換液一次
凍存條件90%FBS+10%DMSO
細胞收到后處理:
細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完quan培養液并封好瓶口是細胞運輸的最hao辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作,培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完quan培養液收集至離心管中,加入6ml完quan培養基,放入37℃、5%CO2孵箱培養;超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養步驟。(注意發貨的是密封培養瓶的話,放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松)
細胞培養步驟:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完quan培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完quan培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,完quan脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右完quan培養基混勻,放入培養箱過夜培養后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代
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