魚細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒用途定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清和組織等樣本中的濃度。

包裝規(guī)格：48T/盒，96T/盒

試劑盒檢測的局限

1）僅供科研使用，不得用于臨床診斷

2）請?jiān)诒驹噭┖袠?biāo)示的有效期內(nèi)使用。

3）試劑盒的試劑不能與其他批號的試劑或其他來源的試劑混合使用。

4）任何操作人員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、孵育溫度、試劑盒保存時間的改變，都將影響結(jié)合反應(yīng)。

5）本試劑盒在設(shè)計(jì)上去除或降低了生物學(xué)樣本中的一些內(nèi)源性干擾因素，并非所有可能的影響因素都已經(jīng)去除。

試劑盒提供的材料

魚細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)

1）所有的化學(xué)試劑理應(yīng)被認(rèn)為具有潛在危害。

2）推薦只有經(jīng)過良好實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)的工作人員方可操作本試劑盒。操作時請佩戴合適的防護(hù)設(shè)施，例如白大衣、乳膠手套、安全眼鏡等。

3）請避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸，請立即用大量清水清洗。

4）試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時，請佩戴防護(hù)服，及防護(hù)眼睛、手及面部的設(shè)施。

5）本試劑盒用于科學(xué)研究，不能用于診斷治療。

6）請不要使用過期的試劑。

7)在試劑盒的貯存或孵育過程請避免強(qiáng)光照射。

8)在操作試劑盒或處理樣本時請佩戴乳膠或一次性手套。

9)為了避免微生物的污染，以及試劑與樣本間的交叉污染，請使用一次性槍頭。

10)使用干凈的容器配制試劑。

11)試劑的準(zhǔn)備必須使用蒸餾水或去離子水。

12)顯色底物在使用之前必須平衡至室溫。

13)液體廢棄物的處理。不含酸的液體廢棄物，加入 1.0 %的次氯酸鈉，浸泡 30 分鐘。含酸的液體廢棄物，請先中和， 再加入次氯酸鈉。

14）經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

15）盒子拆封后必須在一個月內(nèi)使用完；試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染；相關(guān)試劑在分裝時魚細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒技術(shù)要點(diǎn)

1)加校準(zhǔn)品與樣本時，每個校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

2)在應(yīng)用自動洗板機(jī)時，加入洗液之后，設(shè)置 30 秒的浸泡程序，或者在不同的洗滌步驟將微孔板掉轉(zhuǎn) 180 度，這樣可以提高分析的準(zhǔn)確度。

3)為保證結(jié)果的精確性，孵育時封好封板膜。

4)顯色底物在添加之前應(yīng)是無色的。保持顯色底物始終處于避光態(tài)。

5)終止液的添加順序應(yīng)與顯色底物的添加順序相同。

6)添加終止液之后，底物的顏色應(yīng)由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。如果底物呈現(xiàn)綠色，說明終止液與顯色底物沒有充分混勻。

7）在任何情況下，避免接觸微孔板的內(nèi)表面。

8）實(shí)驗(yàn)中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

魚細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒檢測步驟

1）試劑、樣本平衡：檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。配置工作液：按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

2）加標(biāo)準(zhǔn)品、樣本：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。

3）加 HRP標(biāo)記抗體：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL。

4）孵育：使用封板膜封板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

5）洗滌：棄掉液體，每孔加入300μL洗液洗板，靜置20s，洗滌5次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能，必須*移除殘留液體。

6）加底物顯色：每孔加入50μL顯色底物A、B 各50μL，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘。

7）加終止液：每孔加入50μL終止液。顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。

8）檢測讀數(shù)：在 15分鐘之內(nèi)，使用450nm酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測讀數(shù)。

魚細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒樣本處理

細(xì)胞培養(yǎng)上清2000 × g條件下離心20m分鐘，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

血清樣本離心管收集血清。血樣凝集 30 分鐘后，2000 × g 離心 10 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復(fù)凍融。

血漿樣本EDTA、枸櫞酸/鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。2000 × g 離心 20 分鐘收集樣本。即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復(fù)凍融。

組織樣本用預(yù)冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9 mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推 薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻 漿液進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測。

細(xì)胞提取液樣本貼壁細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰/蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì) 胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×106 個細(xì)胞中加入150-200μL PBS重懸并通過反 復(fù)凍融使細(xì)胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心10分鐘，取上清檢測。

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