魚黃體生成素(LH)ELISA試劑盒用途定量檢測血清、血漿、細胞培養上清和組織等樣本中的濃度。

包裝規格：48T/盒，96T/盒

試劑盒檢測的局限

1）僅供科研使用，不得用于臨床診斷

2）請在本試劑盒標示的有效期內使用。

3）試劑盒的試劑不能與其他批號的試劑或其他來源的試劑混合使用。

4）任何操作人員、移液技術、洗滌技術、孵育溫度、試劑盒保存時間的改變，都將影響結合反應。

5）本試劑盒在設計上去除或降低了生物學樣本中的一些內源性干擾因素，并非所有可能的影響因素都已經去除。

試劑盒提供的材料

魚黃體生成素(LH)ELISA試劑盒注意事項

1）所有的化學試劑理應被認為具有潛在危害。

2）推薦只有經過良好實驗室培訓的工作人員方可操作本試劑盒。操作時請佩戴合適的防護設施，例如白大衣、乳膠手套、安全眼鏡等。

3）請避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸，請立即用大量清水清洗。

4）試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時，請佩戴防護服，及防護眼睛、手及面部的設施。

5）本試劑盒用于科學研究，不能用于診斷治療。

6）請不要使用過期的試劑。

7)在試劑盒的貯存或孵育過程請避免強光照射。

8)在操作試劑盒或處理樣本時請佩戴乳膠或一次性手套。

9)為了避免微生物的污染，以及試劑與樣本間的交叉污染，請使用一次性槍頭。

10)使用干凈的容器配制試劑。

11)試劑的準備必須使用蒸餾水或去離子水。

12)顯色底物在使用之前必須平衡至室溫。

13)液體廢棄物的處理。不含酸的液體廢棄物，加入 1.0 %的次氯酸鈉，浸泡 30 分鐘。含酸的液體廢棄物，請先中和， 再加入次氯酸鈉。

14）經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗

15）盒子拆封后必須在一個月內使用完；試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染；相關試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，具體含量以實際收到的實物為主。

魚黃體生成素(LH)ELISA試劑盒技術要點

1)加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

2)在應用自動洗板機時，加入洗液之后，設置 30 秒的浸泡程序，或者在不同的洗滌步驟將微孔板掉轉 180 度，這樣可以提高分析的準確度。

3)為保證結果的精確性，孵育時封好封板膜。

4)顯色底物在添加之前應是無色的。保持顯色底物始終處于避光態。

5)終止液的添加順序應與顯色底物的添加順序相同。

6)添加終止液之后，底物的顏色應由藍色轉變為黃色。如果底物呈現綠色，說明終止液與顯色底物沒有充分混勻。

7）在任何情況下，避免接觸微孔板的內表面。

8）實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

魚黃體生成素(LH)ELISA試劑盒檢測步驟

1）試劑、樣本平衡：檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。配置工作液：按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

2）加標準品、樣本：設置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。

3）加 HRP標記抗體：除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。

4）孵育：使用封板膜封板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

5）洗滌：棄掉液體，每孔加入300μL洗液洗板，靜置20s，洗滌5次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能，必須*移除殘留液體。

6）加底物顯色：每孔加入50μL顯色底物A、B 各50μL，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘。

7）加終止液：每孔加入50μL終止液。顏色由藍色變為黃色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。

8）檢測讀數：在 15分鐘之內，使用450nm酶標儀進行檢測讀數。

魚黃體生成素(LH)ELISA試劑盒樣本處理

細胞培養上清2000 × g條件下離心20m分鐘，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復凍融。

血清樣本離心管收集血清。血樣凝集 30 分鐘后，2000 × g 離心 10 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復凍融。

血漿樣本EDTA、枸櫞酸/鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。2000 × g 離心 20 分鐘收集樣本。即刻檢測，或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復凍融。

組織樣本用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推 薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻 漿液進行超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測。

細胞提取液樣本貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰/蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細胞；懸浮細 胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×106 個細胞中加入150-200μL PBS重懸并通過反 復凍融使細胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心10分鐘，取上清檢測。

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