ELISA實驗-如何降低ELISA的背景

01 洗滌很重要

洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。

02 封閉更關鍵

        封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。

03 抗體濃度須優化

記住，非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。

04 檢測試劑要適量

切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。