血清中經常出現的沉淀到底的原因，這樣還能使用嗎?
 

　　細胞培養中使用血清時經常會遇到沉淀，這些沉淀到底是為何物，對實驗的影響有多大，如何有效去除這些沉淀，古朵生物本文對沉淀的一般情況做了簡單匯總，方便大家查詢和學習。

　　沉淀物到底是什么

　　關于目前血清的過濾處理，不管是國內還是國外，普遍都采用多道100nm的連續過濾方式，從技術上已經去除掉血清中可能含有的支原體、病毒等微生物，所以如果您是通過正規途徑買到的血清(市面上血清魚龍混雜，請選擇高信譽的血清牌子)，原則上不會有生物污染情況。

　　基于多年的實驗研究，用于細胞培養的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物：

　　纖維蛋白

　　是經常出現的較大的沉淀物，可以達到1-2mm，可以用肉眼觀察到。因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)在處理過程中仍然處于溶解狀態，當經過最后的過濾分裝后，就會在瓶中凝結出現纖維蛋白沉淀。

　　硫酸鈣

　　也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現渾濁，并且在37℃培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。

　　其它物質

　　包括脂肪酸酯以及一些蛋白質等，他們也是血清中出現沉淀物的常見原因。

　　血清中出現一些絮狀、泥沙狀等白色固體后，還能用嗎，對實驗的影響有多大?

　　血清中出現沉淀是正常的物理析出現象可放心使用：

　　1、細胞培養效果?

　　多項數據表明，血清析出少量蛋白質后，細胞培養效果并不會有明顯的變化。

　　2、過濾去除沉淀?

　　如果出現大量的沉淀物，血清將很難過濾。

　　一般說來，因為在血清生產時后來已經經過0.22μm及0.1μm濾芯過濾處理，并且按照現行版藥典規定進行無菌檢測，因此不推薦再過濾血清。

　　如非必要，在實驗室中無需再過濾處理血清，以免操作不規范導致污染的發生。

　　3、沉淀or污染?

　　磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端。

　　研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將血清放在培養箱中培養幾天，結果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了;并且當研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時往往可以看到一些可以運動的小黑點，因此就更加確認是血清被污染了。于是，研究者就會花費更多的時間和精力來和生產商確認，但確定血清沒有被污染而只是沉淀。

　　為了避免這些問題的發生，我們建議不要直接將血清放在培養箱中培養觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進行培養以觀察是否有細菌生長。另外，也可以進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認是否有污染。

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