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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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閱讀:1372發(fā)布時(shí)間:2020-2-27
1.一般引物用貯液濃度為10uM。對于剛合成的引物可以根據(jù)期管壁上的說明計(jì)算稀釋至10uM即可(一般引物說明上配制的濃度往往過高,所以必須稀釋至10uM才能利用實(shí)驗(yàn)室小刻度(0.5ul)的移液器取到)。另外引物一旦稀釋完畢,應(yīng)注意分裝小份,防止在用的過程中反復(fù)凍融引物而造成引物的失效。
2.一般25ul反應(yīng)中引物用量為0.5ul(終濃度要求為為0.1——1uM),若引物若放置時(shí)間比較長,則可以適當(dāng)增加引物的用量。引物用量過多,容易導(dǎo)致引物二聚體(電泳時(shí)位于前方不成條帶的小片段)的出現(xiàn)。
1.引物稀釋的方法:配制時(shí)首先將合成的引物12000r/min離心5min,室溫靜置1分鐘,然后再慢慢打開管蓋,根據(jù)引物合成單(或儲(chǔ)存引物的離心管)說明加入一定量的滅菌水(引物說明是加入Buffer,此處加入無菌水即可)以達(dá)到10uM的濃度,在漩渦振蕩器上充分振蕩5-10min,即配成10um的貯存液,-20℃保存?zhèn)溆?/p>
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