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小鼠20S-蛋白酶體elisa檢測試劑盒實驗原理和操作步驟

閱讀:251發布時間:2019-1-9

小鼠20S-蛋白酶體elisa檢測試劑盒實驗原理:

本試劑盒采用競爭法檢測樣本中小鼠20S-蛋白酶體(20S-PSM)的含量。向預先包被了抗體的酶標孔中加入樣本,再加入*標記的識別抗原,在37℃下孵育30min,兩者與固相抗體競爭結合形成免疫復合物,經PBST洗滌除去未結合的*抗原,然后加入親和素-HRP,在37℃下孵育30min,親和素-HRP與*抗原結合,洗滌后結合的HRP催化TMB(四甲基聯苯胺)成藍色,隨后在酸的作用下轉化成黃色,在450nm波長下有吸收峰,吸光值與樣本中抗原的濃度成負相關。

小鼠20S-蛋白酶體elisa檢測試劑盒操作步驟:

1、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
6、顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
7、終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。100U2~8℃

elisa檢測試劑盒  

 


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