駱駝科產生由 2 條重鏈和 2 條輕鏈組成的常規抗體，這些抗體與 Y 形的二硫化物鍵結合在一起。然而，它們也產生免疫球蛋白G的獨-特亞類，也稱為重鏈IgG（hcIgG）。

這些抗體僅由兩條沒有CH1區域的重鏈和在其N末端的抗原結合域（稱為VHH）組成。

hcIgG的獨-特之處在于其單體抗原結合區（VHH）能夠結合具有特異性、親和力，尤其是多樣性的抗原，與傳統抗體相當，而無需與其他區域配對。使用分子工程可以產生VHH碎屑。

為什么要使用艾美捷Covalab VHH片段？

結合隱藏的表位：

它們的空間位阻減少，使它們能夠到達傳統抗體無法獲得的難以獲得的抗原，例如酶的活性位點（有助于抑制酶活性）以及較小的酶，例如溶-菌-酶或核糖核酸酶。

更好的滲透性：

與傳統抗體相比，它們穿透組織的能力增強，在進行免疫組織化學時可以更精確地對組織切片進行染色。

更穩定：

VHH區域的高再折疊能力使它們在熱力學上更加穩定，并能抵抗高溫（高達70°C / 158°F）和極-端pH值，如胃酸。

Covalab艾美捷丨VHH開發：

1-駱駝免疫接種

免疫：

根據Covalab的 88 天方案，免疫步驟包括 4 次注射和 2 次測試出血。

監測：

免疫反應性通過為該項目開發的檢測方法進行監測。

2-噬菌體文庫構建

PBMCs分離和RNA提取：

從最終出血中分離外周血單核細胞（PBMC）并提取總RNA。

cDNA合成和VHH擴增：

RT-PCR 和 VHH 抗體片段擴增

特異性引物設計用于在VHH編碼區域內進行逆轉錄，第二次嵌套PCR允許cDNA擴增。

噬菌體載體克隆：

VHH編碼基因被整合到噬菌體載體中，然后用于轉化感受態細菌以產生噬菌體文庫。

3-平移

目標交互：

將抗原固定在微量滴定板孔的底部，將噬菌體制劑加載到孔中，使其通過在其表面表達的VHH結合抗原。

放大：

洗掉未結合的噬菌體后，剩余的噬菌體被轉導成感受態細菌進行富集和擴增。

選擇：

在每個淘選階段結束時，分離編碼抗原特異性VHH的cDNA

4- 生產和凈化

表達載體中的亞克隆：

插入片段被整合到表達載體中，然后用于轉化感受態細菌。

培養、裂解和親和色譜純化：

通過親和色譜從培養物上清液中純化特異性VHH。

所有編碼特定VHH的cDNA都保存在我們的實驗室中。

Covalab專注于抗體研發領域，涵蓋抗體和試劑盒。擁有多種針對流行和罕見靶標的一抗，涉及多種應用領域，如癌癥，表觀遺傳學，細胞信號傳導，心血管等疾病的生物標志物，神經系統，離子通道，微生物學，病毒學等。還有特色的應用于模式動物斑馬魚的抗體。此外還有各種ELISA試劑盒，ELISPot試劑盒，FluoroSpot試劑盒等。艾美捷科技是Covalab的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。