【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產(chǎn)品名稱：兔椎間盤纖維環(huán)細胞操作步驟
2.組織來源：椎間盤組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
兔椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚，而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內(nèi)層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。
本公司的兔椎間盤纖維環(huán)細胞采用膠原酶-*聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM-F12、FBS、軟骨細胞生長添加劑、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內(nèi)膜細胞等
2、*，專業(yè)的細胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細胞株，免費復(fù)蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor)
羅丹明標(biāo)記的羊抗小鼠IgG MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7)
羅丹明標(biāo)記的羊抗兔IgG MMP-14(Matrix metalloproteinase-14)
FITC標(biāo)記的驢抗羊IgG GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1)
FITC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG Ang- II (Angiotensin II )
辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG GLUT2(Glucose transporter type 2)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗羊IgG ANP(atrial natriuretic peptide)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗羊IgM GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4)
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgM GHRF (GHRH)
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgM ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1)
PE-Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG GLUT4(Glucose transporter type 4)
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM GIP (Gastric Inhibitory polypeptide)
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Protein 2)
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgM GLP-2(Glucagon-like peptide-2)
PE-CY5標(biāo)記的兔抗羊IgM GRP94 (gp96)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的驢抗羊IgG Annexin A
辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗羊IgG G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein)
羅丹明標(biāo)記的羊抗大鼠IgG GR (Glucocorticoid receptor)
Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG Annexin II
PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 )
PE-Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG GTP-CH-1
Cy5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2)
antibody) ELISA Kit 人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體 48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit 人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 48T
BV(Human bacterial vaginosis) ELISA Kit 人細菌病 48T
HSV I Ab(Human Herpes simplexvirus I antibody) ELISA Kit 人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體 48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit 人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 48T
HPV-IgM(Human papillomavirus IgM) ELISA Kit 人狀瘤病毒抗體IgM 48T
HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit 人狀瘤病毒抗體IgG 48T
HSV-Ag2(Human Herpes simplex virus 2) ELISA Kit 人單純皰疹病毒抗原2 48T
fPSA(Human Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit 人游離前列腺特異性抗原 48T
PSA(Human prostate specific antigen) ELISA Kit 人前列腺特異性抗原 48T
PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit 人磷脂酰* 48T
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit 人*磷酸甘油酯 48T
TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit 人總膽汁酸 48T
Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit 人載脂蛋白C3 48T
CH(Human cholesterol) ELISA Kit 人血清總* 48T
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit 人金屬硫蛋白2 48T
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit 人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1 48T
3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit 人3-硝基* 48T
GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit 人糖胺聚糖 48T
CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit 人半胱氨酰白三烯 48T
CALU(Human calumenin) ELISA Kit 人鈣腔蛋白 48T
