1.產品名稱：小鼠真皮成纖維細胞實驗方法
2.組織來源：皮膚組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
小鼠真皮成纖維細胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質內。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——層與網狀層。真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質。 成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的真皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。真皮成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態，合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
本公司的小鼠真皮成纖維細胞采用先*消化、后*-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
人抗狂犬病毒抗體
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白4
人抗甲型肝炎病毒IgM抗體
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3
大鼠血管內皮細胞生長因子D
人抗甲型肝炎病毒IgG抗體
人抗副流感病毒IgM抗體
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1
人抗丁型肝炎病毒抗體
人抗丙型肝炎病毒抗體
大鼠血管內皮細胞生長因子受體1
人抗斑疹傷寒抗體
大鼠血管內皮細胞生長因子受體2
人單核細胞增多性李斯特菌素O
大鼠肝細胞生長因子
人乙型肝炎病毒X抗原
大鼠糖蛋白130
大鼠生長激素
人腺相關病毒
大鼠粒細胞集落刺激因子
人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白
人傷寒抗原
大鼠中性粒細胞趨化蛋白2
人類嗜T淋巴細胞Ⅰ型病毒
大鼠FMS樣*激酶3
人麻疹病毒
大鼠FMS樣*激酶3配體
大鼠堿性成纖維細胞生長因子9
人流行性腮腺炎
大鼠堿性成纖維細胞生長因子4
人抗流行性出血熱病毒抗體IgG
人痢疾內阿米巴抗原
大鼠堿性成纖維細胞生長因子6
大鼠酸性成纖維細胞生長因子1
人萊姆IgG
人空腸彎曲菌黏附蛋白
人衣原體蛋白酶樣活性因子
大鼠凋亡相關因子
Anti- Alpha-Catenin/ Alpha-cats /FITC 熒光素標記α-連環蛋白抗體（α-α鏈接素）IgG 0.2ml
Anti- Beta-catenin/ Beta-cats /FITC 熒光素標記 β-連環蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser33/37) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化β 連環素蛋白抗體IgG 0.2ml
anti-p- Beta catenin/FITC 熒光素標記磷酸化β-連環蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser45)/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化β 連環素蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser552) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化β 連環素蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser675) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化β 連環素蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Thr41/Ser45) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化β 連環素蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti- Gamma-Catenin/ Gamma-cats /FITC 熒光素標記γ-連環蛋白抗體（γ-γ鏈接素）IgG 0.2ml
anti-cath-B/CB/FITC 熒光素標記組織蛋白酶B抗體IgG 0.2ml
Anti-cath-D/CD /FITC 熒光素標記組織蛋白酶D抗體IgG 0.2ml
Anti-cath-G/CG /FITC 熒光素標記組織蛋白酶G抗體IgG 0.2ml
Anti-cath-H/CH /FITC 熒光素標記組織蛋白酶H抗體IgG 0.2ml
Anti-cath-K/CK /FITC 熒光素標記組織蛋白酶K抗體IgG 0.2ml
anti-cath-L/CL /FITC 熒光素標記組織蛋白酶L抗體IgG 0.2ml
Anti-Cathepsin B/FITC 熒光素標記兔抗組織蛋白酶B抗體IgG 0.2ml
Anti-Cav-1/FITC 熒光素標記抗小凹蛋白抗體IgG
