口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒圖片個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒圖片1、什么是定量PCR？
以參照物為標(biāo)準(zhǔn)，對PCR終產(chǎn)物進(jìn)行分析或?qū)?/span>PCR過程進(jìn)行監(jiān)測，從而達(dá)到評估樣本中靶基因的拷貝數(shù)，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴(kuò)增的指數(shù)期進(jìn)行的。
2、定量PCR定量的理論依據(jù)是什么？
特定的待擴(kuò)增基因片段起始含量越大，則指數(shù)擴(kuò)增過程越短，當(dāng)擴(kuò)增速率趨于穩(wěn)定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴(kuò)增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴(kuò)增結(jié)果：Y=X×2n 其中Y代表擴(kuò)增產(chǎn)物量， X代表PCR反應(yīng)體中的原始模板數(shù) n為擴(kuò)增次數(shù)；理論上PCR擴(kuò)增效率為*，PCR產(chǎn)物隨著循環(huán)的進(jìn)行成指數(shù)增長，但實(shí)際上：DNA的每一次復(fù)制都不*，即每一次擴(kuò)增中，模板不是呈2的倍增長；實(shí)際應(yīng)為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴(kuò)增效率：E = 參與復(fù)制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個(gè)PCR擴(kuò)增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環(huán)次數(shù)n≤30時(shí)，E 相對穩(wěn)定，原始模板以相對固定的指數(shù)形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數(shù)期；隨著循環(huán)次數(shù)n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數(shù)形式增加，后進(jìn)入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個(gè)擴(kuò)增過程，任何干擾PCR指數(shù)擴(kuò)增的因素都會影響擴(kuò)增產(chǎn)物的量，使得PCR擴(kuò)增終產(chǎn)物的數(shù)量與原始模板數(shù)量之間沒有一個(gè)固定的比例關(guān)系，通過檢測擴(kuò)增終產(chǎn)物很難對原始模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量。近年來研究人員通過大量的實(shí)踐，研究了相對準(zhǔn)確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴(kuò)增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴(kuò)增效率，n為循環(huán)數(shù)，Tn表示在n個(gè)周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，Tn-1表示在n-1個(gè)周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，T0為原始模板數(shù)量。設(shè)定PCR到達(dá)指數(shù)擴(kuò)增期時(shí)，產(chǎn)生一定的熒光(熒光依賴于某一循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的總量，即特定的拷貝數(shù)K，為常數(shù)，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時(shí)的循環(huán)數(shù)為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數(shù)即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數(shù)，故上式為循環(huán)數(shù)（CP）對原始模板拷貝數(shù)的對數(shù)（lg T0）一次方程，其標(biāo)準(zhǔn)形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標(biāo)上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標(biāo)準(zhǔn)曲線。例如下圖為單管實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線：
口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒圖片目前熒光定量PCR均采用外標(biāo)定量
外標(biāo)法定量PCR擴(kuò)增效率的計(jì)算，由于標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標(biāo)準(zhǔn)曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴(kuò)增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴(kuò)增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時(shí)也有大于2的結(jié)果，如下圖所示。另外也可直接根據(jù)系列稀釋外標(biāo)在該次實(shí)時(shí)熒光PCR的結(jié)果來大略分析擴(kuò)增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標(biāo)在PCR擴(kuò)增時(shí)有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴(kuò)增到指數(shù)期時(shí)熒光值相同則代表此點(diǎn)的終末拷貝數(shù)相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數(shù)得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據(jù)PCR擴(kuò)增過程中是否加入某種標(biāo)記物、標(biāo)記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標(biāo)記定量，③酶標(biāo)記定量檢測法，④熒光定量PCR技術(shù)
熒光定量PCR 主要原理發(fā)射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發(fā)出另一波長的熒光，同時(shí)將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光大增強(qiáng)。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發(fā)射波長大約為520nm。PCR擴(kuò)增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個(gè)循環(huán)。
SYBR Green I 的缺點(diǎn)：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結(jié)合發(fā)光，對PCR反應(yīng)中的非特異性擴(kuò)增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。 SYBR Green I的優(yōu)點(diǎn)：SYBR Green I的優(yōu)點(diǎn)是因?yàn)槠淙秉c(diǎn)產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內(nèi)外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行定量？它與傳統(tǒng)的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統(tǒng)的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內(nèi)參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術(shù)的難點(diǎn)主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴(kuò)增范圍內(nèi)（只有在此范圍內(nèi)PCR產(chǎn)物信號才與初始模板的拷貝數(shù)成比例）。（2）一旦線性擴(kuò)增范圍確定以后，如何找到一個(gè)合適的方法檢測結(jié)果。為了保證線性，研究者要擴(kuò)增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個(gè)基因的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；有的研究者加一個(gè)競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個(gè)PCR模擬（mimic）反應(yīng)，即用相似的引物與目標(biāo)產(chǎn)物共擴(kuò)增，而擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進(jìn)行檢測。（3）大多數(shù)是終點(diǎn)檢測，即PCR到達(dá)平臺期后進(jìn)行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺期時(shí)，檢測重現(xiàn)性極差。同一個(gè)模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點(diǎn)產(chǎn)物量推算出起始模板量；雖然加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統(tǒng)定量PCR的缺點(diǎn)是：勞動(dòng)強(qiáng)度大、定量不準(zhǔn)確、重復(fù)性差。
葛根 Ge Gen 1g

七葉皂速Sqvqnlqcfscponin6802-41-0HPLC≥98%，20mg/vial

Sulfocostunolide A SULFOCOSTUNOLIDE A 1016983-51-9

*氧化*16837-52-8Oxymaine

石杉堿乙 Huperzine B 103548-82-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

芒果苷 Mangiferin 分 子 量：422.3400 CAS編號：4773-96-0 分子式：C16H12O4 別　　名：芒果甙 【性狀】淡灰黃色針狀結(jié)晶(50%乙醇)。熔點(diǎn)267～272℃(分解)。旋光度+43.3°(c=0.9，比啶)，32°(乙醇)。略溶于、乙醇、水、可溶于熱稀、熱稀乙醇，不溶于非極性溶劑。

五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Schisandrin B 五味子乙素 61281-37-6 C23H28O6 靈酸錄喹(100421

含量測定鹽酸異丙腎上線素100166-201004常溫，避光50mg

Glyceryl Behenate 甘油山崳酸酯標(biāo)準(zhǔn)品18641-57-1 200mg

直桿桉Eucalyptus maideni Macrocarpal A 大果桉醛 A 132951-90-7 C28H40O6 ≥97.5%

21165-77-5 *雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 20mg

鹽醋納曲同Nalexonexy7nochloride20mg

Demetxoxy-7-O-metxylcapillarisin 61854-37-3

etxyl Vanillin乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)品121-32-4200mg

本并黃素 604-59-1 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

人孕激素elisa試劑盒  進(jìn)口分裝  TFA-aa-U  TFA-aa-U  CAS號：  869222-68-4  質(zhì)量規(guī)格：  >98%,BR

人乙酰肝素酶elisa試劑盒  進(jìn)口分裝  2',3'-二脫氧尿苷(ddU)  2',3'-Dideoxyuridine  CAS號：  1491534  質(zhì)量規(guī)格：  >98%,進(jìn)分

人衣原體蛋白酶樣活性因子elisa試劑盒  進(jìn)口分裝  2-(4-硝基苯基)乙胺鹽酸鹽  4-Nitrophenethylamine Hydrochloride  CAS號：  29968-78-3  質(zhì)量規(guī)格：  >98%,*

人血漿抗凝蛋白Celisa試劑盒  進(jìn)口分裝  表兒沒食子酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  (−)-Epicatechin gallate/ECG   CAS號：  1257-08-5  質(zhì)量規(guī)格：  HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人褪素(MT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進(jìn)口分裝   羅丹明 123  英文名稱：  Luo Danming 123  CAS號：  62669-70-9  分子式：  380.82  分子量：   C21H17ClN2O3

人胃泌素(GT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進(jìn)口分裝   堿性品綠  英文名稱：  Basic green  CAS號：  569-64-2  分子式：  364.91  分子量：   C23H25ClN2

人細(xì)胞周期素D3(CCND3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進(jìn)口分裝   橙黃Ⅱ

口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒圖片大鼠原癌基因C-Fos  進(jìn)口分裝  Ginsenoside Rk2  Ginsenoside Rk2  494753-69-4  C42H70O12  ≥98%

大鼠降鈣素基因相關(guān)肽  進(jìn)口分裝  Ginsenoside Rk1  Ginsenoside Rk1  364779-14-6  C36H60O7  ≥98%

大鼠二胺氧化酶  進(jìn)口分裝  Ginsenoside Rk3  Ginsenoside Rk3  364779-15-7  C36H60O8  ≥98%

大鼠雙氫睪  進(jìn)口分裝  Ginsenoside Ro  Ginsenoside Ro  34367-04-9  C48H76O19  ≥98%
口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒圖片PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。