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北京方程嘉鴻科技有限公司
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ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
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二磷酸腺苷(ADP)
補體蛋白3
IgM抗體的檢測用于傳染病的早期診斷中。間接法ELISA一般僅適用于檢測總抗體或IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體,因標本中一般同時存在較高濃度的IgG抗體,后者將競爭結合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結合到固相上。因此如用抗人IgM作為二抗,間接測定IgM抗體,必須先將標本用A蛋白或抗IgG抗體處理,以除去IgG的干擾。在臨床檢驗中測定抗體IgM時多采用捕獲包被法。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM)。然后加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用,呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒染的早期診斷。甲型肝炎病毒(HAV)抗體的檢測模式見圖2-7。 類風濕因子(RF)同樣能干擾捕獲包被法測定IgM抗體,導致假陽性反應。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
二磷酸腺苷(ADP)操作步驟:1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。4. 配液:將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。7. 溫育:操作同 3。8. 洗滌:操作同 5。9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。
二磷酸腺苷(ADP)
大腸菌素(colicin)
小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
α突觸核蛋白(α-SYN)
*(UK)
補體片斷3b(C3b)
戊糖素(Pentosidine)
CXC趨化因子受體3(CXCR3)
*激酶2(Tyk-2)
B細胞受體(BCR)
可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)
Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)
柯薩奇病毒IgG(Cox V-IgG)
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