植物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次原理產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
植物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
SYBR Green 1 熒光染料
〖英文名稱〗：SYBR Green 1；SYBR Green I nucleic acid gel stain；SDNA-Nucleic acids stain dye
〖其他名稱〗：SYBRGREENⅠ核苷酸膠體染料；SDNA核苷酸染液；Green-DNA Dye 核苷酸膠體染料
〖CAS號〗：163795-75-3
〖級別〗：BR
描述：原液。每微升染料可配制10毫升Agarose gel。操作簡單，無須脫色或沖洗。至少可檢出20 pg DNA，高于EB染色法25～100倍。與dsDNA 結(jié)合熒光信號會(huì)增強(qiáng)800~1000倍，0.1 ml Green-DNA Dye is sufficient for 20-25 minigels。
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙色液體。花青類染料，致突變性明顯低于EB，使用安全。與核酸結(jié)合呈現(xiàn)綠色熒光(zui大吸收為470nm)，檢測核酸的靈敏度比EB高，也可用紫外燈進(jìn)行觀測。用常規(guī)乙醇沉淀方法處理核酸時(shí)，該染料可全部從雙鏈核酸上去掉。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)SYBR Green 1是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析。
〖保存〗：-20℃
氯代磺酚C
〖英文名稱〗：Chlorosulphonphenol S；Sulfochlorophenol S sodium calcium salt；Sulfochlorophenol S
〖其他名稱〗：氯磺酚S；氯代磺酸C；2，7-雙（5-氯-2-羥基-3-磺基苯偶氮）-1，8-二羥基萘-3，6-二磺酸；2，7-雙（5-氯-2-羥基-3-磺基苯偶氮）變色酸；3,6-雙[(5-氯-2-羥基-3-磺基苯基)偶氮]-4,5-羥基-2,7-萘二磺酸；氯代磺酚S；磺氯酚S
〖CAS號〗：2103-73-3
C22H14C12N4O16S4=789.53
〖級別〗：顯色劑
分光有效〖含量〗：≥80.0%
對鈮的靈敏度試驗(yàn)：合格
水溶性試驗(yàn)：合格
RIPA 裂解液 ( 弱 ) 真菌 RNAout
NP-40 裂解液 真菌 RNAout
*干粉 真菌種屬鑒定 PCR Mix 1
螢火蟲熒光素 真菌種屬鑒定 PCR Mix 2
ATP 溶液，1mM 真菌種屬鑒定 PCR Mix 3
Klenow 片段 真菌種屬鑒定 PCR Mix 4
乙?；Ｑ灏椎鞍?nbsp; 真菌種屬鑒定 PCR Mix 5
DNA HEPES( 羥乙基乙硫磺酸 ) 真菌種屬鑒定 PCR Mix 6
無內(nèi)毒素螢火蟲熒光素 真菌種屬鑒定 PCR Mix 7
Sephacryl S-400 基質(zhì) 真菌總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒
鏈霉親和素 真空抽濾盒
鏈霉親和素，AP 標(biāo)記 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2
DNA Triton
會(huì)員1.png)
