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植物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次原理

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更新時間:2017-01-19 16:24:32瀏覽次數:239次

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產品簡介

植物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

植物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次原理產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

植物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

SYBR Green 1 熒光染料
〖英文名稱〗:SYBR Green 1;SYBR Green I nucleic acid gel stain;SDNA-Nucleic acids stain dye
〖其他名稱〗:SYBRGREENⅠ核苷酸膠體染料;SDNA核苷酸染液;Green-DNA Dye 核苷酸膠體染料
〖CAS號〗:163795-75-3
〖級別〗:BR
描述:原液。每微升染料可配制10毫升Agarose gel。操作簡單,無須脫色或沖洗。至少可檢出20 pg DNA,高于EB染色法25~100倍。與dsDNA 結合熒光信號會增強800~1000倍,0.1 ml Green-DNA Dye is sufficient for 20-25 minigels。
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙色液體。花青類染料,致突變性明顯低于EB,使用安全。與核酸結合呈現綠色熒光(zui大吸收為470nm),檢測核酸的靈敏度比EB高,也可用紫外燈進行觀測。用常規乙醇沉淀方法處理核酸時,該染料可全部從雙鏈核酸上去掉。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)SYBR Green 1是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析。
〖保存〗:-20℃
氯代磺酚C
〖英文名稱〗:Chlorosulphonphenol S;Sulfochlorophenol S sodium calcium salt;Sulfochlorophenol S 
〖其他名稱〗:氯磺酚S;氯代磺酸C;2,7-雙(5-氯-2-羥基-3-磺基苯偶氮)-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸;2,7-雙(5-氯-2-羥基-3-磺基苯偶氮)變色酸;3,6-雙[(5-氯-2-羥基-3-磺基苯基)偶氮]-4,5-羥基-2,7-萘二磺酸;氯代磺酚S;磺氯酚S
〖CAS號〗:2103-73-3 
C22H14C12N4O16S4=789.53
〖級別〗:顯色劑
分光有效〖含量〗:≥80.0%
對鈮的靈敏度試驗:合格
水溶性試驗:合格

RIPA 裂解液 ( 弱 )    真菌 RNAout
NP-40 裂解液    真菌 RNAout
*干粉    真菌種屬鑒定 PCR Mix 1
螢火蟲熒光素    真菌種屬鑒定 PCR Mix 2
ATP 溶液,1mM    真菌種屬鑒定 PCR Mix 3
Klenow 片段    真菌種屬鑒定 PCR Mix 4
乙酰化牛血清白蛋白    真菌種屬鑒定 PCR Mix 5
DNA  HEPES( 羥乙基乙硫磺酸 )    真菌種屬鑒定 PCR Mix 6
無內毒素螢火蟲熒光素    真菌種屬鑒定 PCR Mix 7
Sephacryl S-400 基質    真菌總蛋白質微量提取試劑盒
鏈霉親和素    真空抽濾盒
鏈霉親和素,AP 標記    真細菌種屬鑒定 PCR Mix 2
DNA  Triton    


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