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植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理

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更新時間:2017-01-19 16:20:45瀏覽次數:183次

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產品簡介

植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(〖灼燒殘渣〗:18.0~24.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙棕色結晶。253~254℃時分解。溶于水和乙醇,微溶于丙同和乙二醇乙迷,幾乎不溶于其他有機溶劑。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑,金屬著色劑。常用1%鈉鹽作指示劑
〖保存〗:RT
茜素黃R鈉鹽
〖英文名稱〗:Alizarin yellow R sodium salt;Sodium 5-[(4-nitrophenyl)azo]salicylate;Mordant Yellow 3R 
〖其他名稱〗:對硝基苯偶氮*;茜草素黃R鈉鹽;媒染黃3R;茜素黃鈉鹽
〖CAS號〗:1718-34-9 
C13H8N3NaO5=309.21
〖級別〗:IND 
pH變色域:10.0(黃)~12.0(紅)
乙醇溶解試驗:合格
靈敏度試驗:合格
水溶解試驗:合格
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計):18.0~24.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:棕黃色粉末。溶于水,其溶液呈棕黃色
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑,金屬著色劑。常用1%鈉鹽作指示劑
〖保存〗:RT
酸性茜素藍B

酪蛋白溶液 (TBS)    柱式病毒 DNAout
酪蛋白溶液 (PBS)    柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒
ONPG 干粉    柱式病毒 RNAout
Tris 緩沖鹽溶液 (TBS)    柱式凋亡 DNAout
氯萘酚溶液,3mg/mL    柱式動物 DNAout
CN/DAB 底物套裝     柱式動物 RNA-DNA 雙提試劑盒
ABTS 溶液,7mM     柱式動物 RNAout
OPD 干粉    柱式動物 RNAout
pNPP 干粉    柱式動物線粒體 DNAout,PCR 
DNA 包被溶液    柱式動物線粒體 DNAout,測序
乙烯乙二醇    柱式凍存血液 DNAout
HRP 穩定劑 / 稀釋劑    柱式凍存血液 DNAout
鹽酸胍溶液,8M    柱式分枝桿菌 DNAout
    柱式鼠尾 DNAout
    自誘導液體培養基 


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