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哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法

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更新時間:2017-01-19 16:20:07瀏覽次數:214次

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產品簡介

哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖英文名稱〗:Acid alizarin blue B
〖其他名稱〗:媒染藍B;3-[(5-氯-2-羥基苯基)偶氮]-4,5-二羥基-2,7-萘二磺酸二鈉鹽;媒介藍13;鉻藍SE;酸性鉻深蘭;鉻蘭SE;酸性媒介溶藍;酸性鉻深藍;酸性媒介深藍
〖CAS號〗:1058-92-0
C16H9ClN2Na2O9S2=518.81
〖級別〗:BS
紅外光譜〖鑒別〗:合格
λmax:552~556nm(甲醇)
λmax:526.~530nm(甲醇)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:藍色至棕色帶金屬光澤粉狀或深藍色粉末。溶于水呈品紅色,溶于溶纖素,稍溶于乙醇。在濃硫酸中呈溶藍色,稀釋后呈品紅色、在濃硝酸中呈棕光紅色溶注估燒堿液中呈紅光藍色溶液。其水溶液,加濃鹽酸呈品紅色、加濃氫氧呈藍色。染色時遇銅、〖鐵〗,色光變化大。水中溶解度(80℃)50g/L
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑。
〖保存〗:RT
堿藍6B
〖英文名稱〗:Alkali blue 6B;Acid Blue 119;Nicholson blue;Triphenyl triaminotriphenylcarbinol sulfonic acid sodium salt;C.I.42765  
〖其他名稱〗:堿性藍6B;六藍光堿染天藍;堿性天藍;堿蘭6B;酸性藍119;[[4-[羥基雙(4-苯胺基苯基)甲基]苯基]氨基]苯磺酸鈉鹽;硫氮蒽天藍;硫堇藍

蛋白折疊試劑盒    柱式分枝桿菌 RNAout
考馬斯亮藍 R-250    柱式糞便 DNAout
考馬斯亮藍 G-250    柱式糞便 RNAout
多核苷酸磷酸化酶    柱式腐殖酸清除劑
辣根過氧化物酶,偶聯    柱式腐殖酸清除劑
一站式平末端克隆試劑盒    柱式骨骼 DNAout
脈沖電泳 Marker( 酵母染色體 PFG)    柱式海洋動物 DNAout
脈沖電泳 Marker(Lambda LadderPFG)    柱式醬油 DNAout
脈沖電泳 Marker( 低范圍 PFG)    柱式酵母 DNAout
動物種屬鑒定 PCR Mix 1    柱式酵母質粒 DNAout
動物種屬鑒定 PCR Mix 2    柱式昆蟲 DNAout
定 PCR Mix 4


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