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動物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理

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更新時間:2017-01-19 16:10:31瀏覽次數:248次

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產品簡介

動物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

動物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
動物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖CAS號〗:596-27-0 
C22H18O4=346.38 
〖級別〗:IND
pH變色域:8.2(無色)~9.8(紅色)
紅外光譜鑒定:和對照品匹配
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或黃色結晶性粉末。易溶于乙醇、乙迷和冰乙酸,溶于稀堿溶液呈紫色,微溶于水,不溶于苯。〖熔點〗223℃。zui大吸收波長 566(381)nm
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑
〖保存〗:RT
鄰甲*絡合劑
〖英文名稱〗:o-Cresolphthalein complexon;Me-talphthalein I;o-Cresolphthalexon;Phthalein purple;Phthalein complexone;o-Cresolphthalein di(methylaminodiacetic acid) 
〖其他名稱〗:N,N'-[(3-氧代-1(3H)-異苯并呋喃基亞基]雙[(6-羥基-5-甲基-3,1-亞苯基)亞甲基]雙[N-(羧基甲基)*];酞紫;金屬酞;*紫;2-甲*絡合劑;3',3''-雙[[雙(羧甲基)氨基]甲基]-5', 5''-二甲基* 
〖CAS號〗:2411-89-4 
C32H32N2O12=636.61 
〖級別〗:AR
〖含量〗(分光光度法):≥80.0%
靈敏度:合格
〖水溶解實驗劑〗:合格

細胞計數液 (Vi-CELL 儀 )    β -瓊脂糖酶
Protein A+G 瓊脂糖    β- 瓊脂糖酶Ⅰ
即用型 GFP 標簽蛋白裂解液    β- 瓊脂糖酶Ⅰ
動態顯色法內毒素定量試劑盒    β- 基乙醇
動態濁度法內毒素定量試劑盒    β- 基乙醇,蛋白
WGA 糖蛋白分離試劑盒    β- 基乙醇,電泳
大提柱式酵母 DNAout    β-Actin 小鼠單抗
小牛胸腺 DNA 溶液    β-Actin 小鼠單抗
DNA 探針變性液    β-D- 阿糖胞苷
MMLV 逆轉錄酶 (H-)    β-Tubulin 小鼠單抗
耐熱型 MMLV 逆轉錄酶 (H-)    β-Tubulin 小鼠單抗
96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 真空法 )    γ
PCR Mix 染料    γ- 環狀糊精
DAB 法*雜交試劑盒    γ- 球蛋白 ( 牛血 )
TMB 法*雜交試劑盒    λ 噬菌體 DNAout
ATP 溶液,2.5mM    φ
UTP 溶液,2.5mM    φ29 DNA 聚合酶
GTP 溶液,2


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