動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 3100 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 3100 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
游離甲苯*：合格
有機(jī)雜質(zhì)：合格
〖灼燒殘?jiān)剑ㄒ浴剂蛩猁}〗計(jì)）：≤1.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色至帶棕色結(jié)晶性粉末。對(duì)熱不穩(wěn)定。易溶于水，不溶于乙醇、乙迷。無(wú)色的堿溶液可與鈣、鍶、鋇鹽絡(luò)合生成紫色或深紅色，與鎂絡(luò)合為粉紅色，與〖重金屬〗絡(luò)合則為無(wú)色。〖熔點(diǎn)〗181～185℃(分解)。zui大吸收波長(zhǎng) 575(377)nm。商品亦有含水鈉鹽，淺粉紅色粉末。溶于水，不溶于乙醇
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合滴定指示劑，測(cè)定鈣、鍶、鋇、鎂和鎘
〖保存〗：RT
二甲酚橙一鈉鹽
〖英文名稱(chēng)〗：Xylenol orange sodium salt；3,3′-Bis[N,N-di(carboxymethyl)aminomethyl]-o-cresolsulfonphthalein sodium salt；o-Cresolsulfonphth-alein-3,3′-bismethyliminodiacetic acid sodium salt
〖其他名稱(chēng)〗：二甲酚桔黃一鈉鹽；3,3′-雙[N,N-二(羧甲基)氨基甲基]鄰甲酚磺酰酞一鈉鹽；鄰甲酚磺酰酞-3,3′-雙甲基亞氨基二乙酸一鈉鹽；二甲酚橙一鈉鹽；二甲*橙鈉鹽；二甲酚橙鈉鹽；二甲酚桔黃鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：63721-83-5
C31H31N2NaO13S=694.65
〖級(jí)別〗：BS
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色結(jié)晶性粉末,易吸濕。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT，避光
二甲酚橙二鈉鹽
〖英文名稱(chēng)〗：Xylenol orange disodium salt；3,3′-Bis[N,N-di(carboxymethyl)aminomethyl]-o-cresolsulfonphthalein disodium salt；o-Cresolsulfonphth-alein-3,3′-bismethyliminodiacetic acid disodium salt
〖其他名稱(chēng)〗：二甲酚桔黃二鈉鹽；3,3′-雙[N,N-二(羧甲基)氨基甲基]鄰甲酚磺酰酞二鈉鹽；鄰甲酚磺酰酞-3,3′-雙甲基亞氨基二乙酸二鈉鹽；二甲酚橙二鈉鹽；二甲*橙鈉鹽；二甲酚橙鈉鹽；二甲酚桔黃鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：1611-35-4
CTP 溶液，2.5mM φX174RF Ⅱ DNA
預(yù)稀釋 BGG 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 產(chǎn)品名稱(chēng)
咪唑溶液，2M 鎳柱介質(zhì)
Zenker 固定液 鎳柱介質(zhì)
Helly 固定液 一站式 His 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝
Carnoy 固定液 一站式 His 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝
Karnovsky 固定液 裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL 裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒 ( 含轉(zhuǎn)化液 )
Tth 核酸內(nèi)切酶 IV 海量 PCR 片段純化試劑盒
一站式* TUNEL 試劑盒 (FITC/POD) 兔抗 His 標(biāo)簽多抗，HRP 標(biāo)記
DNase I 干粉 通用型 LAMP 試劑盒
Oligo(dT) 纖維素 一站式 PCR-SSCP 套裝
0.5μg/μL
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