動物種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實驗步驟產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
動物種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個小片段）。
C31H30N2Na2O13S=716.62
〖級別〗：IND
λ max：433～437nm
靈敏度試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色結(jié)晶性粉末,易吸濕。易溶于水，不溶于無水乙醇。水溶液為紅色，酸性溶液中為檸檬黃色，金屬絡(luò)合物為鮮紅色，堿性溶液中為紅紫色。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合指示劑，滴定〖鋅〗、鉍、鎘、鈷、銅、〖鐵〗、汞、銦、鑭系元素、〖鎳〗、〖鉛〗、鈧、釷、鋯、駝、鈾(VI)、釩等。光度測定〖鋅〗、鋁、鈹、鉍、鑭、鈮、〖鎳〗、鈀、釷、釔、鋯等。酸堿指示劑
〖保存〗：RT，避光
二甲酚橙四鈉
〖英文名稱〗：Xylenol orange tetrasodium salt；3,3'-Bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]-o-cresolsulfonephthalein tetrasodium salt
〖其他名稱〗：二甲酚桔黃四鈉；二甲酚橙四鈉鹽；二甲*橙鈉鹽
〖CAS號〗：3618-43-7
C31H28N2Na4O13S=760.58
〖級別〗：IND
靈敏度試驗：合格
游離鄰甲酚磺酞：合格
〖干燥失重〗：≤15.0%
〖灼燒殘渣〗：30～50%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色結(jié)晶性粉末。易溶于水。水溶液為紅色，酸性溶液中為檸檬黃色，金屬絡(luò)合物為鮮紅色、堿性液紅紫色
*溶液 ,50mg/mL 一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝
克必隆零背景 T 載體 Bst DNA 聚合酶，大片段
*溶液 ,50mg/mL dNTP 溶液 ( 標(biāo)記 )
Klenow 片段 (3´ → 5´ exo-) TAE 電泳液 ,50×
牛血清白蛋白封堵液 TAE 電泳液 ,50×
4% 多聚甲醛 (RNA ) 一管式點突變試劑盒
4% 多聚甲醛 DNA 嵌套缺失試劑盒
Baker 甲醛鈣中性固定液 預(yù)混型 BCIP/NBT 溶液
Lillie 甲醛中性固定液 PBS 緩沖液 ,10×
6nt 隨機(jī)引物，
