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動物種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 16:08:52瀏覽次數:220次

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產品簡介

動物種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

動物種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
動物種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

C31H30N2Na2O13S=716.62
〖級別〗:IND
λ max:433~437nm
靈敏度試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅棕色結晶性粉末,易吸濕。易溶于水,不溶于無水乙醇。水溶液為紅色,酸性溶液中為檸檬黃色,金屬絡合物為鮮紅色,堿性溶液中為紅紫色。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡合指示劑,滴定〖鋅〗、鉍、鎘、鈷、銅、〖鐵〗、汞、銦、鑭系元素、〖鎳〗、〖鉛〗、鈧、釷、鋯、駝、鈾(VI)、釩等。光度測定〖鋅〗、鋁、鈹、鉍、鑭、鈮、〖鎳〗、鈀、釷、釔、鋯等。酸堿指示劑
〖保存〗:RT,避光
二甲酚橙四鈉
〖英文名稱〗:Xylenol orange tetrasodium salt;3,3'-Bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]-o-cresolsulfonephthalein tetrasodium salt 
〖其他名稱〗:二甲酚桔黃四鈉;二甲酚橙四鈉鹽;二甲*橙鈉鹽 
〖CAS號〗:3618-43-7
C31H28N2Na4O13S=760.58 
〖級別〗:IND
靈敏度試驗:合格
游離鄰甲酚磺酞:合格
〖干燥失重〗:≤15.0%
〖灼燒殘渣〗:30~50%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅棕色結晶性粉末。易溶于水。水溶液為紅色,酸性溶液中為檸檬黃色,金屬絡合物為鮮紅色、堿性液紅紫色

*溶液 ,50mg/mL    一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝
克必隆零背景 T 載體    Bst DNA 聚合酶,大片段
*溶液 ,50mg/mL    dNTP 溶液 ( 標記 )
Klenow 片段 (3´ → 5´ exo-)    TAE 電泳液 ,50×
牛血清白蛋白封堵液    TAE 電泳液 ,50×
4% 多聚甲醛 (RNA )    一管式點突變試劑盒
4% 多聚甲醛    DNA 嵌套缺失試劑盒
Baker 甲醛鈣中性固定液    預混型 BCIP/NBT 溶液
Lillie 甲醛中性固定液    PBS 緩沖液 ,10×
    6nt 隨機引物,


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