動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次價(jià)格合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次價(jià)格按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合指示劑、酸堿指示劑
〖保存〗：RT，避光
鈣黃綠素
〖英文名稱〗：Calcein；Fluorescein complexon；Fluorescein-2,7-bis-methylaminodiacetic acid sodium salt
〖其他名稱〗：3,3′-雙(甲胺二乙酸)熒光素；熒光素絡(luò)合劑；熒光素配位劑；雙[N,N-雙（羧甲基）氨基甲基]熒光素；3,3’-雙(甲氨二乙酸)熒光素；N,N’-[[3’,6’-二羥基-3-氧代螺[異苯并呋喃-1(3H),9’-(9H)占噸]-2’,7’-二基]雙(亞甲基)]雙[N-(羧基甲基)*]
〖CAS號(hào)〗：1461-15-0
C30H26N2O13=622.55
〖級(jí)別〗：AR
絡(luò)合滴定試驗(yàn)：合格
水溶解試驗(yàn)：合格
游離熒光素：合格
〖灼燒殘?jiān)剑?le;1.0%
〖干燥失重〗：≤10.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：亮黃色粉末。溶于乙醇和堿，微溶于水。其鈉鹽為橙紅色結(jié)晶，溶于水，呈黃色而有綠色熒光，不溶于無(wú)水乙醇和乙迷
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合指示劑。熒光指示劑。測(cè)定鈣、鍶、鋇、銅和錳
戊二醛磷酸緩沖固定液 秋水仙素溶液
戊二醛二甲鈉緩沖固定液 包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝
Zetterqvist 固定液 玻璃珠法柱式真菌 DNAout
乙醇 - 甲醛固定液 酸洗玻璃珠系列
多聚甲醛 - 磷酸緩沖固定液 SSC 溶液 ,20×
多聚甲醛 - 氫氧固定液 *干粉
Maximov 固定液 DNA 鹽酸胍溶液，8M
PLP 固定液
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