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胚胎裂解液1mL原理

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更新時間:2017-01-19 16:06:54瀏覽次數:405次

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產品簡介

胚胎裂解液1mL原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

胚胎裂解液1mL原理產品介紹:

胚胎裂解液1mL原理產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖保存〗:RT
鈣黃綠素二鈉鹽
〖英文名稱〗:Calcein disodium salt;Bis[N,N-di(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein disodium salt, Fluorescein-bismethyliminodiacetic acid disodium salt
〖其他名稱〗:鈣黃綠素鈉鹽
〖CAS號〗:108750-13-6
C30H24N2Na2O13=666.50
〖級別〗:BS〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙色或棕色粉末或晶體,溶于水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
鉻T
〖英文名稱〗:Eriochrome black T;1-(1-Hydroxy-2-naphthylazo)-6-nitro-2-naphthol-4-sulfonic acid sodium salt;C.I.Mordant black II;C.I. 14645 
〖其他名稱〗:依來鉻T;羊毛鉻T;媒介T;酸性媒介T;1-(1-羥基-2-萘偶氮)-6-硝基-2-萘酚-4-磺酸鈉 
〖CAS號〗:1787-61-7 
C20H12N3NaO7S=461.38 
〖級別〗:IND

PLPD 固定液    超快轉染試劑盒
Methacarn 固定液    高效 E.coli 感受態細胞制備試劑盒
PFG 固定液    鈣蛋白酶抑制劑Ⅱ溶液,10mg/mL
對苯醌固定液    *抑制劑溶液,20mg/mL
ECD-G 固定液    細胞核微量制備試劑盒
細胞周期與凋亡檢測試劑盒(PI 法)    干粉型 LB 培養基
Zamboni 固定液    銀染清除劑
考馬斯亮藍 R-250 染液    鮭魚精 DNA 溶液
DB3.1 感受態細胞    重蒸酚
SYBR Green II 核酸染料    酸酚
態細胞    Oligo dT12-18 引物,0.5μg/μL
    電泳溴酚藍溶液


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