單細(xì)胞懸浮液1mL實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品分類(lèi) 品牌分類(lèi)

  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

常用PCR引物

種屬鑒定PCR Mix

單細(xì)胞擴(kuò)增

其他擴(kuò)增試劑盒

LAMP擴(kuò)增

全基因組擴(kuò)增（WGA）

即用型RT-PCR

RT

即用型PCR

PCR成分及添加劑

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

單細(xì)胞懸浮液1mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

單細(xì)胞懸浮液1mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
單細(xì)胞懸浮液1mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

靈敏度試驗(yàn)：合格
〖灼燒殘?jiān)?以〖硫酸鹽〗計(jì))：≤20.0%
水溶解試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕色粉末，能溶于熱水，冷卻后成紅棕色溶液，稍溶于醇，并呈棕光品紅色；微溶于丙同。遇過(guò)量鹽酸生成棕紫色沉淀；在濃硝酸中呈枯桔黃色；遇氫氧呈深藍(lán)色，后變紅色，溶于濃硫酸成藍(lán)色溶液，稀釋后生成棕色沉淀。水中溶解度（90℃）為25g/L。染色時(shí)遇銅、〖鐵〗時(shí)色光影響較大。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)測(cè)定水硬度用指示劑，金屬絡(luò)合指示劑，測(cè)定鈣、鎂、鋇、姻、錳、〖鉛〗、鈧、鍶、〖鋅〗和鋯
〖保存〗：RT
鉻藍(lán)R
〖英文名稱(chēng)〗：Eriochrome blue black R；Mordant Black 17；Acid chrome blue black；Palatine chrome black 6BN；Calcon；Chrome blue black R；Anthracene blue black；Solochrome dark blue
〖其他名稱(chēng)〗：依來(lái)鉻藍(lán)R；酸性媒介R；酸性鉻藍(lán)R；酸性媒介藍(lán)；茜素藍(lán)；鉻蘭R；鈣試劑；媒介17；3-羥基-4-(2-羥基-1-萘偶氮)-1-萘磺酸鈉；宮殿染料；鈣紫紅素
〖CAS號(hào)〗：2538-85-4
C20H13N2NaO5S=416.39
〖級(jí)別〗：IND
靈敏度試驗(yàn)：合格
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕色或深棕色粉末，溶于水和乙醇。水溶液呈紫色溶液，加鹽酸于水溶液中有棕色沉淀，醇溶液為藍(lán)紅色，濃硝酸溶液為黃色，氫氧溶液為棗紅色，硫酸液為藍(lán)色，用水稀釋析出紅色沉淀。zui大吸收波長(zhǎng)569nm。有刺激性
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合指示劑。測(cè)定鈣、鎂、鎘、錳和〖鋅〗。熒光分析測(cè)鋁。測(cè)定水硬度

酸水解酪素   - 混合液
DMEM( 高糖 )   酚 - - 混合液 (RNA 提取 )
DMEM( 低糖 )   酚 - - 混合液 (DNA 提取 )
供體馬血清   Earle 溶液
弗氏不*佐劑   杜氏 PBS 緩沖液 ,10×
DH10B 感受態(tài)細(xì)胞   溴化乙錠干粉 (EB)
XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞   SSPE 溶液 ,20×
BL21-CodonPlus(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞   超快蛋白銀染試劑盒
Rosetta 感受態(tài)細(xì)胞   質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒
AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞   BLOTTO 溶液
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞   干粉型 SOB 培養(yǎng)基
GV3101 農(nóng)桿菌感受

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