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GTP 溶液,2.5mM2mL實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-01-19 15:58:52瀏覽次數(shù):411次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

GTP 溶液,2.5mM2mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

GTP 溶液,2.5mM2mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
GTP 溶液,2.5mM2mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹:

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

鄰苯二酚紫
〖英文名稱〗:Pyrocatechol violet;Catecholsulfonphthalein;Pyrocatecholsulfonephthalein;Catechol violet 
〖其他名稱〗:兒茶酚紫;鄰苯二酚磺酞;焦兒茶酚紫;兒茶酚磺酞;二茶酚紫;鄰二酚磺酞
〖CAS號(hào)〗:115-41-3
C19H14O7S=386.38
〖級(jí)別〗:IND
溶解試驗(yàn):合格
〖干燥失重〗:≤0.5%
〖灼燒殘?jiān)?以〖硫酸鹽〗計(jì)):≤0.1%
PH變色域 :5.2(黃)~6.8(紫)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅棕色結(jié)晶粉末,有金屬光澤。易溶于水和乙醇,微溶于無(wú)水乙醇,不溶于非極性溶劑(如醚、苯、二甲苯)。其水溶液呈黃色,當(dāng)〖酸度〗增加時(shí)則由黃變紅,pH6以上溶液變?yōu)樽仙琾H9以上變?yōu)榧t紫色
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合指示劑。滴定鉍、鎘、鈷、銅、〖鐵〗、鎵、銦、鎂、〖鉛〗、錳、〖鎳〗、釷、〖鋅〗。用于鉍、硼、鉻(III)、銅、鈮、銻、錫、鋯、釷的光度測(cè)定。紙色譜的噴顯劑
〖保存〗:RT
比布里希猩紅
〖英文名稱〗:Acid red 66;Biebrich scarlet WS; Ponceau BS;C.I. 26905;Biebrich Scarlet;Sodium 6-(2-hydroxynaphthylazo)-3,4'-azodibenzenesulfonate

10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝 )    玻璃勻漿器 ,10mL
HinfI     3'-RACE 試劑盒
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝長(zhǎng)尖 )    5'-RACE 試劑盒
KpnI    沉淀型 TMB 顯色試劑盒
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌 )    DNA  CTAB 溶液,20%
Mlu    柱式糞便 RNAout
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌長(zhǎng)尖 )    柱式軟體動(dòng)物 DNAout
MboI    柱式水樣 DNAout
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )    柱式軟體 RNAout
NcoI    通用型 RT-LAMP 試劑盒
5.2,3M 
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝 )    DNA  Tris HCl,1M,pH6.5

 


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