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GTP 溶液,100mM0.25mL實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 15:56:34瀏覽次數:432次

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產品簡介

GTP 溶液,100mM0.25mL實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

GTP 溶液,100mM0.25mL實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
GTP 溶液,100mM0.25mL實驗步驟產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖其他名稱〗:麗春紅BS;酸性紅66;比布列西猩紅;猩紅B;6-(2-羥基萘偶氮)-3,4'-偶氮二苯磺酸鈉;新品酸性紅;C.I.溶劑紅24;鄰甲苯偶氮基鄰甲苯偶氮基-β-萘酚;藏花猩紅;新品酸性橙
〖CAS號〗:4196-99-0 
C22H14N4Na2O7S2=556.48
〖級別〗:BS
〖含量〗:≥70%
zui大吸收波長:506~510nm
吸光度試驗:530~540
吸光度之比(250nm/260nm):0.95~1.00
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅色至褐色粉末,溶于水(30mg/mL),溶于水呈橙紅色溶液,微溶于乙醇和乙二醇乙迷,不溶于多數有機溶劑。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT
間甲酚紫
〖英文名稱〗:m-Cresol purple;Cresol Purple
〖其他名稱〗:間甲*紫;間甲酚磺酞;間甲酚磺酰酞;3,3'-二甲基*;燦爛甲酚紫;甲*紫;甲酚固紫;間甲*紫
〖CAS號〗:2303-01-7 
C21H18O5S=382.43
〖級別〗:IND 

10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長尖 )    柱式植物油 DNAout
200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝 )    柱式植物 RNA-DNA 雙提試劑盒
NdeI    水樣病毒沉淀劑
200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝帶芯 )    柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒
NotI    柱式細菌 RNA-DNA 雙提試劑盒
200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 盒裝 )    柱式軟骨 RNAout
200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 盒裝已滅菌 )    尼龍膜,13×20cm
PstI    PVDF 膜,0.45μm,13×20cm
200μLRNase-free 黃吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )    DNA  SDS 溶液,10%
PvuII    DNA 乙酸鈉,pH


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