NTP 溶液,10mM0.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹:

NTP 溶液,10mM0.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。
〖保存〗:2~8℃
香豆素
〖英文名稱〗:Coumarin;1,2-Benzopyrone;5,6-Benzo-2-pyrone;cis-o-Coumarinic acid lactone;Coumarinic anhydride;Tonka bean camphor
〖其他名稱〗:香豆內(nèi)酯;1,2-苯并哌哢;氧雜萘鄰?fù)秽徰踺镣槐讲⑧徰踯煌?,2-苯并吡喃酮;2H-1-苯并吡喃-2-酮
〖CAS號(hào)〗:91-64-5
C9H6O2=146.14
〖級(jí)別〗:AR
〖含量〗:≥98.0%
〖熔點(diǎn)〗:68~70℃
乙醇溶解試驗(yàn):合格
〖灼燒殘?jiān)剑?le;0.1%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:無(wú)色斜方或長(zhǎng)方晶體或粉末。有香莢蘭豆香,有灼燒味,味苦。溶于乙醇、乙迷、氯方、揮發(fā)油和氫氧化堿溶液中,微溶于沸水。〖相對(duì)密度〗(d204)0.935。〖熔點(diǎn)〗68~70℃。沸點(diǎn)297~299℃。閃點(diǎn)162℃。
紅細(xì)胞 NADH 高鐵血紅蛋白還原酶測(cè)試盒 植物線粒體純化試劑盒 ( 粗提 )
琥珀酸脫氫酶測(cè)試盒 植物線粒體純化試劑盒 ( 精提 )
活性氧 ( 羥自由基 ) 測(cè)試盒 ( 比色法 ) 宿主細(xì)胞系列
活性氧檢測(cè)試劑盒 *瓊脂糖
肌酸激酶測(cè)試劑盒 超敏化學(xué)發(fā)光 (HRP) 檢測(cè)試劑盒(ECL)
堿性磷酸酶測(cè)試劑盒 超敏化學(xué)發(fā)光 (HRP) 檢測(cè)試劑盒(ECL)
堿性磷酸酶測(cè)試劑盒 血液保存和 DNA 純化套裝
抗離子酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 SP6 RNA 聚合酶
抗酒石酸酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 SP6 RNA 聚合酶
葡萄糖 -6- 磷