m7G（5´）ppp（5´）A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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RT

即用型PCR

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

m7G（5´）ppp（5´）A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

m7G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
m7G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

m7G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹：

m7G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

〖其他名稱〗：酸性藍(lán)9；罌紅二鈉鹽；雙[4-（N-乙基-N-3-磺酸苯甲基）氨基苯基]-2-磺酸甲苯基二鈉鹽；食品藍(lán)1；羊毛罌紅A；C.I.食品藍(lán)2(42090)；藍(lán)色1號(hào)；亮藍(lán)1
〖CAS號(hào)〗：3844-45-9
C37H34Na2N2O9S3=792.85
〖級(jí)別〗：BR
〖含量〗：≥85.0%
λmax：625～630nm
紅外光譜〖鑒別〗：和對(duì)照品匹配
紫外光譜UV spectrometry：符合
〖干燥失重〗：≤10 % (135℃)
吸光度Absorbance min.：0.350(2.5mg/L, 0.02mol/L 醋酸銨溶液，625～630nm)(以干基計(jì))
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：具有金屬光澤的紅紫色或暗紫色粉末。易溶于水，水溶液呈藍(lán)色。可溶于甘油，乙醇及丙二醇。耐光性，耐熱性，耐酸性，耐堿性均好，對(duì)檸檬酸，酒石酸穩(wěn)定。〖熔點(diǎn)〗：283℃
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑。
〖保存〗：RT，避光
鈣鎂試劑
〖英文名稱〗：Calmagite；1-(1-Hydroxy-4-methyl-2-phenylazo)-2-naphthol-4-sulfonic acid；3-Hydroxy-4-(2-hydroxy-5-methylphenylazo)naphthalene-1-sulfonic acid
〖其他名稱〗：3-羥基-4-[(2-羥基-5-甲基苯基)偶氮]-1-萘磺酸；1-(1-羥基-4-甲基-2-苯偶氮)-2-萘酚-4-磺酸；鈣鎂指示劑

m7G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD實(shí)驗(yàn)步驟總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒 (ABTS 快速法 )   Xa 因子蛋白酶
總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒 (FRAP 法 )   腸激酶 ( 輕鏈 )
總基測(cè)試盒 / 總脂酶測(cè)試盒   腸激酶 ( 輕鏈 )
D/F12 培養(yǎng)基   Poly(A) 聚合酶
D/F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )   ATP 依賴的 DNase
DMEM 培養(yǎng)基 ( 高糖 )   CpG 甲基轉(zhuǎn)移酶 (M.SssI)
DMEM 培養(yǎng)基 ( 高糖，含 10% 胎牛血清 )   即用型藍(lán)白 T 載體 B 型 (T7-T3, 有 MCS)
F12 培養(yǎng)基   即用型藍(lán)白 T 載體 C 型 (T7-T3，無(wú) MCS)
F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )   即用型藍(lán)白 T 載體 D 型 ( 無(wú)啟動(dòng)子，有 MCS)
F12K 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 )   即用型藍(lán)白 T 載體 E 型 ( 無(wú)啟動(dòng)子，無(wú) MCS)
F12K 液體培養(yǎng)基 ( 無(wú)血清和雙抗 )   自誘導(dǎo)液體培養(yǎng)基 (arab 啟動(dòng)子 )
10% 胎牛血清 )

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