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T3 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次原理

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更新時間：2017-01-19 15:40:39瀏覽次數(shù)：239次

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產(chǎn)品簡介

T3 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次原理運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

T3 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
T3 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。

〖保存〗：RT
焦油紫
〖英文名稱〗：Cresyl Violet acetate；9-Amino-5-imino-5H-benzo(a)phenoxazine acetate salt
〖其他名稱〗：醋酸甲酚紫；甲酚紫；甲酚青蓮；甲酚紫乙酸鹽
〖CAS號〗：10510-54-0
C18H15N3O3=321.33
〖級別〗：BR
〖含量〗Dye content：～70%
〖熔點〗：140～143℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：綠色或色粉末，溶于水
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
魯米諾
〖英文名稱〗：Luminol；3-Aminophthalhydrazide, 5-Amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione
〖其他名稱〗：3-氨基鄰苯二甲酰肼；發(fā)光氨；3-氨基苯二甲酰縮肼；冷光劑；3-氨基苯二甲酰肼；5-氨基-2,3-二氫-1,4-二氮雜萘二酮；3-氨基鄰苯二甲酸酐
〖CAS號〗：521-31-3
C8H7N3O2=177.16
〖級別〗：BR

成骨細胞生長因子   dGTP 溶液，100mM
成纖維細胞生長因子   β- 瓊脂糖酶Ⅰ
成纖維細胞生長因子 -2   β- 瓊脂糖酶Ⅰ
成纖維細胞生長因子 - 不含動物成分   ATP 溶液，100mM
動物上皮細胞生長因子   UTP 溶液，100mM
肝細胞生長因子   CTP 溶液，100mM
骨骼肌細胞生長因子   GTP 溶液，100mM
色素細胞生長因子   Fluorescein-12-dUTP 溶液，1mM
色素細胞生長因子 - 不含 TPA   Aminoally-dUTP 溶液，10mM
滑膜細胞生長因子   一站式 CTAB-PAGE 電泳套裝
間充質(zhì)干細胞成骨細胞分化生長因子   一站式 Blue Native PAGE 電泳套裝
   Southern 動物 DNAout

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