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T3 體外轉錄試劑盒50 次原理

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更新時間:2017-01-19 15:40:39瀏覽次數:238次

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產品簡介

T3 體外轉錄試劑盒50 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

T3 體外轉錄試劑盒50 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
T3 體外轉錄試劑盒50 次原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

產品介紹:

產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖保存〗:RT
焦油紫
〖英文名稱〗:Cresyl Violet acetate;9-Amino-5-imino-5H-benzo(a)phenoxazine acetate salt
〖其他名稱〗:醋酸甲酚紫;甲酚紫;甲酚青蓮;甲酚紫乙酸鹽
〖CAS號〗:10510-54-0 
C18H15N3O3=321.33
〖級別〗:BR
〖含量〗Dye content:~70%
〖熔點〗:140~143℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:綠色或色粉末,溶于水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
魯米諾
〖英文名稱〗:Luminol;3-Aminophthalhydrazide, 5-Amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione
〖其他名稱〗:3-氨基鄰苯二甲酰肼;發光氨;3-氨基苯二甲酰縮肼;冷光劑;3-氨基苯二甲酰肼;5-氨基-2,3-二氫-1,4-二氮雜萘二酮;3-氨基鄰苯二甲酸酐
〖CAS號〗:521-31-3 
C8H7N3O2=177.16
〖級別〗:BR

成骨細胞生長因子    dGTP 溶液,100mM
成纖維細胞生長因子    β- 瓊脂糖酶Ⅰ
成纖維細胞生長因子 -2    β- 瓊脂糖酶Ⅰ
成纖維細胞生長因子 - 不含動物成分    ATP 溶液,100mM
動物上皮細胞生長因子    UTP 溶液,100mM
肝細胞生長因子    CTP 溶液,100mM
骨骼肌細胞生長因子    GTP 溶液,100mM
色素細胞生長因子    Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM
色素細胞生長因子 - 不含 TPA    Aminoally-dUTP 溶液,10mM
滑膜細胞生長因子    一站式 CTAB-PAGE 電泳套裝
間充質干細胞成骨細胞分化生長因子    一站式 Blue Native PAGE 電泳套裝
    Southern 動物 DNAout

 


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