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SP6 體外轉錄試劑盒50 次實驗方法

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更新時間:2017-01-19 15:39:33瀏覽次數:237次

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產品簡介

SP6 體外轉錄試劑盒50 次實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

SP6 體外轉錄試劑盒50 次實驗方法產品介紹:

SP6 體外轉錄試劑盒50 次實驗方法產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖含量〗Dye content:≥98.0%
〖干燥失重〗:≤0.5%
發光靈敏性試驗:合格
堿溶液試驗:合格
〖熔點〗:140~143℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或淡黃色結晶。易溶于堿液,能溶于稀酸,不溶于水和有機溶劑,難溶于醇。中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中時,顯強烈的亮藍色熒光?!既埸c〗319~320℃。魯米諾是一種zui古老的和zui常用的試劑,在堿性條件下可被過氧化物氧化,同時發光,魯米諾和過氧化物之間的氧化還原反應需要催化劑,這種催化劑一般為多價金屬離子、過氧化物酶如〖鐵〗、辣根過氧化物酶等,此種方法常用于檢測過氧化物、〖重金屬〗、過氧化物酶的〖含量〗,以及由此衍生的檢測自由基、進行毒物分析和基于過氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。在通常情況下魯米諾與過氧化輕在某些催化劑存在時化學發光反應非常迅速。zui常用催化劑是金屬離子,在很大濃度范圍內,金屬離子濃度與發光強度成正比,從而可進行某些金屬離子的化學發光分析,利用這一反應可以分析那些含有金屬離子的有機化合物,達到很高的靈敏度。其次是利用有機化合物對魯米諾化學發光反應的抑制作用,測定對化學發光反應具有猝滅作用的有機化合物。其三是通過偶合反應間接測定無機或有機化合物
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)發光測試: Emmax 440 nm (化學發光; 60 mM K2S2O8, 100 mM K2CO3, pH 11.5; 添加H2O2后),化學發光試劑及指示劑,常用于化學發光分析,如金屬陽離子、血液免疫等
〖保存〗:RT,避光
魯米諾單鈉鹽
〖英文名稱〗:Luminol sodium salt;3-Aminophthalhydrazide;5-Amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione
〖其他名稱〗:3-氨基鄰苯二甲酰肼一鈉鹽;3-氨基苯二甲酰肼單鈉鹽 
〖CAS號〗:20666-12-0 
C8H6N3O2Na=199.14
〖級別〗:試劑級
純度:≥98.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或暗綠色或黃色粉末。溶于水:50mg/ml 

間充質干細胞軟骨細胞分化生長因子    硫酸葡聚糖
間充質干細胞生長因子    聚乙二醇
間充質干細胞生長因子 - 無血淸    填入法 DNA 末端標記試劑盒 A
間充質干細胞脂防細胞分化生長因子    填入法 DNA 末端標記試劑盒 B
角膜上皮細胞生長因子    填入法 DNA 末端標記試劑盒 C
角質細胞生長因子    Southern DNA Marker( * )
角質細胞生長因子 - 不含 BPE    Southern DNA Marker(DIG)
角質細胞生長因子 - 不含動物成分    Southern Marker DL2000( * )
口腔角質細胞生長因子    Southern Marker DL2000(DIG)
卵巢上皮細胞生長因子    Southern Marker Oligo( * )
內皮細胞生長因子    Southern Marker Oligo(DIG)
腦膜細胞生長因子


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