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SP6 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法

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品       牌

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更新時(shí)間:2017-01-19 15:39:33瀏覽次數(shù):238次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

SP6 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

SP6 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹:

SP6 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

〖含量〗Dye content:≥98.0%
〖干燥失重〗:≤0.5%
發(fā)光靈敏性試驗(yàn):合格
堿溶液試驗(yàn):合格
〖熔點(diǎn)〗:140~143℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或淡黃色結(jié)晶。易溶于堿液,能溶于稀酸,不溶于水和有機(jī)溶劑,難溶于醇。中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中時(shí),顯強(qiáng)烈的亮藍(lán)色熒光。〖熔點(diǎn)〗319~320℃。魯米諾是一種zui古老的和zui常用的試劑,在堿性條件下可被過(guò)氧化物氧化,同時(shí)發(fā)光,魯米諾和過(guò)氧化物之間的氧化還原反應(yīng)需要催化劑,這種催化劑一般為多價(jià)金屬離子、過(guò)氧化物酶如〖鐵〗、辣根過(guò)氧化物酶等,此種方法常用于檢測(cè)過(guò)氧化物、〖重金屬〗、過(guò)氧化物酶的〖含量〗,以及由此衍生的檢測(cè)自由基、進(jìn)行毒物分析和基于過(guò)氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。在通常情況下魯米諾與過(guò)氧化輕在某些催化劑存在時(shí)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)非常迅速。zui常用催化劑是金屬離子,在很大濃度范圍內(nèi),金屬離子濃度與發(fā)光強(qiáng)度成正比,從而可進(jìn)行某些金屬離子的化學(xué)發(fā)光分析,利用這一反應(yīng)可以分析那些含有金屬離子的有機(jī)化合物,達(dá)到很高的靈敏度。其次是利用有機(jī)化合物對(duì)魯米諾化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抑制作用,測(cè)定對(duì)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)具有猝滅作用的有機(jī)化合物。其三是通過(guò)偶合反應(yīng)間接測(cè)定無(wú)機(jī)或有機(jī)化合物
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)發(fā)光測(cè)試: Emmax 440 nm (化學(xué)發(fā)光; 60 mM K2S2O8, 100 mM K2CO3, pH 11.5; 添加H2O2后),化學(xué)發(fā)光試劑及指示劑,常用于化學(xué)發(fā)光分析,如金屬陽(yáng)離子、血液免疫等
〖保存〗:RT,避光
魯米諾單鈉鹽
〖英文名稱〗:Luminol sodium salt;3-Aminophthalhydrazide;5-Amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione
〖其他名稱〗:3-氨基鄰苯二甲酰肼一鈉鹽;3-氨基苯二甲酰肼單鈉鹽 
〖CAS號(hào)〗:20666-12-0 
C8H6N3O2Na=199.14
〖級(jí)別〗:試劑級(jí)
純度:≥98.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或暗綠色或黃色粉末。溶于水:50mg/ml 

間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子    硫酸葡聚糖
間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子    聚乙二醇
間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 無(wú)血淸    填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 A
間充質(zhì)干細(xì)胞脂防細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子    填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 B
角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 C
角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Southern DNA Marker( * )
角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含 BPE    Southern DNA Marker(DIG)
角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含動(dòng)物成分    Southern Marker DL2000( * )
口腔角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Southern Marker DL2000(DIG)
卵巢上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Southern Marker Oligo( * )
內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Southern Marker Oligo(DIG)
腦膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子


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