天凈沙 Ribo-SPIA cDNA擴增試劑盒 20 次實驗方法 產(chǎn)品介紹:

天凈沙 Ribo-SPIA cDNA擴增試劑盒 20 次實驗方法產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現(xiàn)多個小片段)。
〖保存〗:RT
3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉
〖英文名稱〗:DHBS;HDCBS;3,5-Dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid;Sodium 3,5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonate
〖其他名稱〗:2-羥基-3,5-二氯苯磺酸鈉鹽;3,5-二氯-2-羥烷基苯磺酸鈉
〖CAS號〗:54970-72-8
C6H3C12NaSO4=265.05
〖級別〗:試劑級
〖含量〗:≥99.0%
水溶性試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色至類白色結(jié)晶粉末。溶于水。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)尿酸、*比色測定。過氧化輕光度檢測的顯色底物。水溶性、靈敏度高、穩(wěn)定性好,替代效果比較差的2,4-二氯*
〖保存〗:RT
2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸
〖英文名稱〗:TBHBA;2,4,6-Tribromo-3-hydroxybenzoic acid;3-Hydroxy-2,4,6-tribromobenzoic acid
〖其他名稱〗:3-羥基-2,4,6-三溴苯甲酸
Calcein Blue *溶液 ,100mg/mL
Calcein M 硫酸*溶液 ,15mg/mL
CFDA SE ( 細胞增殖示蹤熒光探針 ) C 溶液 ,5mg/mL
Congo Red *溶液 ,2mg/mL
Cyanine 3-NHS Ester 新生霉素溶液 ,50mg/mL
Cyanine 5-NHS Ester *鹽酸鹽溶液 ,100mg/mL
DAF-FM DA(NO 熒光探針 ) * G 鉀鹽溶液 ,200mg/mL
Dansyl chloride * G 鈉鹽溶液
Di-2-ANEPEQ 多粘菌素 B 硫酸鹽
Di-8-ANEPPS *溶液 ,100mg/mL
DiBAC4(3) 鏈脲佐菌素溶液 ,10mg/mL
Red( 高爾基體紅色熒光探針 ) 大鼠淋巴細胞分離液 1.083
小鼠胰島細胞分離液