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核酸稀釋液,測 OD 100mL實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 15:26:56瀏覽次數:433次

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產品簡介

核酸稀釋液,測 OD 100mL實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

核酸稀釋液,測 OD 100mL實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
核酸稀釋液,測 OD 100mL實驗步驟產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖CAS號〗:14348-40-4
C7H3Br3O3=374.81
〖級別〗:BR
純度:≥98.0%
〖熔點〗:145~149℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色至奶油色結晶或粉末。不溶于水。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酶比色測定, "TBHBA"尿酸被尿酸酶在*氧化,產生的過氧化輕和4-氨基*和2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸反應生成Chinonimine
〖保存〗:2~8℃
氨三乙酸
〖英文名稱〗:NTA;Nitrilotriacetic acid;N,N-Bis(carboxymethyl)glycine;Tri(carboxymethyl)amine;Triglycine;α,α′,α″-Trimethylaminetricarboxylic acid;Chelaton I;Trilon A
〖其他名稱〗:氨基三乙酸;氮三乙酸;N,N-雙(羧甲基)*;三(羧甲基)胺;三*;α,α′,α″-*基胺三羧酸;氨羧絡合劑I;絡合劑I;托立龍A;特里隆A;氮川三乙酸;次氮基三乙酸;次氨基三乙酸;N,N-二(羧甲基)*;氮基三乙酸;氮川三乙酸氨羧絡合劑I
〖CAS號〗:139-13-9
C6H9NO6=191.14
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥98.5%
〖氯化物〗:≤0.002%
〖硫酸鹽〗:≤0.002%

Dihydroethidium( 超氧化物陰離子熒光探針 )    衣霉素溶液 ,5mg/mL
Dihydrorhodamine 123     鹽酸*溶液 ,50mg/mL
DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )    *溶液 ,10mg/mL
DiIC1(5) 碘化物    L- * ( 還原型 )
DiIC12(3) 高氯酸化物    *
DiO( 細胞膜綠色熒光探針 )    柱式凍存血液 DNAout
DiOC6(3) 碘化物    柱式凍存血液 DNAout
ER-Tracker Red( 內質網紅色熒光探針 )    天凈沙鎳柱原位再生試劑盒
Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )    血液線粒體和核 DNA 雙提試劑盒 
Fluo-3,五銨鹽    大鼠細胞分離液 1.061
Fluorescein-5-maleimide    大鼠胰島細胞分離液 1.063
Fura-2 AM( 鈣離子熒光探針 )    大鼠內皮細胞分離液 1.066
Fura-2,五銨鹽    大鼠 NK 細胞分離液 1.068
Golgi-Tracker 


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