LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照50 次原理

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照50 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照50 次原理合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照50 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

〖CAS號(hào)〗：604-44-4
C10H7C1O=178.61
〖級(jí)別〗：試劑級(jí)
純度：≥97.0%
〖熔點(diǎn)〗：120～121℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色針狀結(jié)晶或類(lèi)白色至灰色、淡紅色、淺棕色粉末。對(duì)光和空氣敏感。能升華。易溶于乙醇、乙迷、氯方和苯。〖熔點(diǎn)〗120～121℃。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)電泳測(cè)試，適用于印跡膜上過(guò)氧化物酶檢測(cè)。過(guò)氧化物酶染色：用在等電聚焦和硝酸纖維素膜免疫印跡檢測(cè)專(zhuān)一性抗原中；快速多色Western blot印跡中。
〖保存〗：2～8℃，避光
2-萘酚
〖英文名稱〗：2-Naphthol；β-Hydroxynaphthalene；2-Hydroxynaphthalene；Isonaphthol；2-Naphthalenol；C.I.37500
〖其他名稱〗：二萘酚；乙萘酚；異萘酚；β-萘酚；β-羥基萘；2-羥基萘
〖CAS號(hào)〗：135-19-3
C10H8O=144.17
〖級(jí)別〗：AR
〖含量〗：≥99.0%
〖熔點(diǎn)〗：121～123℃

Quin-2AM   小鼠 NK 細(xì)胞分離液 1.076
Rhod-2，三鈉鹽   小鼠單核細(xì)胞分離液 1.090
Rhodamine123   小鼠淋巴細(xì)胞分離液 1.092
SPQ(6- 甲氧基 -N-(3- 磺丙基 ) 喹啉 )   小鼠白細(xì)胞分離液 1.093
TMRE   小鼠中性粒細(xì)胞分離液 1.100
TSQ(6- 甲氧基 -(8-p- 甲苯磺酰胺 ) 喹啉   小鼠粒細(xì)胞分離液 1.128
Tubulin-Tracker Red( 微管紅色熒光探針 )   人血液和骨髓造血干細(xì)胞分離液 1.068-1
Zinquin 乙酯   大鼠單核細(xì)胞分離液 1.082
1400W(iNOS 抑制劑 )   分子雜交爐
5-Fluorouracil(5- 脲嘧啶 )   紫外交聯(lián)儀
Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)   雜交管 (35×100mm)
Ac-IETD-FMK(Caspase8Inhibitor)   雜交管 (35×200mm)
Ac-LEHD-FMK(Caspase9Inhibitor)   雜交管 (35×300mm)
Actinomycin D( 基因轉(zhuǎn)錄抑制劑 )   液體樣品 DNAout
AG490(JAK 抑制劑 )   綠如蘭核酸染料 ( 可見(jiàn)光型 )
AICAR(AMPK 激活劑 )   Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
   SMD1168 酵母菌種

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