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單孢子全基因組擴增試劑盒30 次原理

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更新時間:2017-01-19 15:20:29瀏覽次數:396次

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產品簡介

單孢子全基因組擴增試劑盒30 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

單孢子全基因組擴增試劑盒30 次原理產品介紹:

單孢子全基因組擴增試劑盒30 次原理產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖保存〗:RT,避光
蒽酮
〖英文名稱〗:Anthrone;9(10H)-Anthracenone;Carbothrone;Anthranone
〖其他名稱〗:9,10-二氫-9-氧蒽;9(10H)-蒽酮;恩酮;9,10-二氫蒽-9-酮
〖CAS號〗:90-44-8
C14H10O=194.23
〖級別〗:AR
四錄化碳溶解試驗:合格
蒽醇:合格
對蔗糖靈敏度:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:無色針狀或黃色結晶。溶于丙同、苯等多數有機溶劑,不產生熒光,微溶于水。〖熔點〗155℃。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)測定體液中糖分、肝臟組織中的動物淀粉。
〖保存〗:RT
四丁基硫酸氫銨

Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )    X33 酵母菌種
Nocodazole( 有絲分裂抑制劑 )    1A75 枯草宿主菌菌種
NS-2028(sGC 抑制劑 )    BS168 枯草宿主菌菌種
NS-398(COX-2 抑制劑 )    SMD1163 酵母菌種
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )    JM110 菌種
Okadaic acid 鉀鹽 (PP1 和 PP2A 抑制劑 )    HB2151 菌種
Paclitaxel(TAXOL)( * )    Tuner(DE3)plysS 菌種
PD 98059(MAPKK 抑制劑 )    AD494(DE3) 菌種
PDTC(NF-κB 抑制劑 / 抗氧化劑 )    BL21 SI 菌種
Phorbol12-myristate13-acetate(PKC 激活劑 )     BL21-CodonPlus-RP 菌種
Pifithrin-a(p53 抑制劑 )    C41(DE3) 菌種
PMA/TPA (P


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