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單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次原理

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次原理產(chǎn)品介紹：

單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次原理產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

〖保存〗：RT，避光
蒽酮
〖英文名稱(chēng)〗：Anthrone；9(10H)-Anthracenone；Carbothrone；Anthranone
〖其他名稱(chēng)〗：9,10-二氫-9-氧蒽；9(10H)-蒽酮；恩酮；9,10-二氫蒽-9-酮
〖CAS號(hào)〗：90-44-8
C14H10O=194.23
〖級(jí)別〗：AR
四錄化碳溶解試驗(yàn)：合格
蒽醇：合格
對(duì)蔗糖靈敏度：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：無(wú)色針狀或黃色結(jié)晶。溶于丙同、苯等多數(shù)有機(jī)溶劑,不產(chǎn)生熒光,微溶于水。〖熔點(diǎn)〗155℃。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)測(cè)定體液中糖分、肝臟組織中的動(dòng)物淀粉。
〖保存〗：RT
四丁基硫酸氫銨

Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )   X33 酵母菌種
Nocodazole( 有絲分裂抑制劑 )   1A75 枯草宿主菌菌種
NS-2028(sGC 抑制劑 )   BS168 枯草宿主菌菌種
NS-398(COX-2 抑制劑 )   SMD1163 酵母菌種
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )   JM110 菌種
Okadaic acid 鉀鹽 (PP1 和 PP2A 抑制劑 )   HB2151 菌種
Paclitaxel(TAXOL)( * )   Tuner(DE3)plysS 菌種
PD 98059(MAPKK 抑制劑 )   AD494(DE3) 菌種
PDTC(NF-κB 抑制劑 / 抗氧化劑 )   BL21 SI 菌種
Phorbol12-myristate13-acetate(PKC 激活劑 )    BL21-CodonPlus-RP 菌種
Pifithrin-a(p53 抑制劑 )   C41(DE3) 菌種
PMA/TPA (P