即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

常用PCR引物

種屬鑒定PCR Mix

單細(xì)胞擴(kuò)增

其他擴(kuò)增試劑盒

LAMP擴(kuò)增

全基因組擴(kuò)增（WGA）

即用型RT-PCR

RT

即用型PCR

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理產(chǎn)品介紹：

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：無(wú)色片狀或針狀結(jié)晶。1g溶于10ml沸水或10ml熱乙醇、37.5ml沸苯。易溶于稀的堿性或酸性溶液，幾乎不溶于乙迷和石油醚。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)顯影劑。
〖保存〗：RT，避光
α-萘酚苯甲醇
〖英文名稱(chēng)〗：α-Naphtholbenzein；4,4′-(α-Hydroxybenzylidene)di-1-naphthol；p-Naphtholbenzein
〖其他名稱(chēng)〗：α-納富妥苯；4-[(4-羥基-1-萘基)苯基亞甲基]-1(4H)-萘酮；α-對(duì)萘酚苯；對(duì)萘酚苯甲醇；4,4’-(α-羥基亞芐基)二(1-萘酚)；α-萘酚基萘酚醌基苯甲烷；α-萘酚醌苯基甲烷；α-萘酚醌烷；α-萘酚苯；1-萘酚苯；α-苯甲醇萘
〖CAS號(hào)〗：145-50-6
C27H18O2=374.43
〖級(jí)別〗：IND
純度：≥90.0%
pH變色域： 8.2(橙，黃)～9.8(藍(lán)，綠)
〖熔點(diǎn)〗：230～235℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色或暗紅色或褐色粉末。對(duì)二氧化碳和酸非常靈敏。溶于乙醇、乙迷、苯和冰乙酸，不溶于水。有刺激性。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑，pH 8.5(黃)～9.8(綠)。
〖保存〗：RT，避光

血液 RNAout    Y1090 菌種
一管式病毒 RNAout   AH109 酵母菌種
一管式病毒 RNAout   EBY100 酵母菌種
植物 RNAout   GS190 酵母菌種
植物 RNAout   GS200 酵母菌種
固相 RNase 清除劑   KM71 酵母菌種
固相 RNase 清除劑   Rosetta-gami B(DE3)plysS 菌種
液相 RNase 清除劑   AG1 菌種
溴化乙錠清除劑   MDS 42recA 菌種
RNAi，RNA 干擾載體及基因片段等系列   ScarabXpress T7lac 菌種
RNA *保存液   BL21（DE3）plysS 菌種
核糖核苷復(fù)合物 (RVC),0.2M   TG1 菌種
微量 RNA 助沉劑   HB101 菌種
( 人源 )

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