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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司


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即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-19 15:14:18瀏覽次數(shù):419次

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產(chǎn)品簡介

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹:

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個小片段)。

偶氮胭脂紅B
〖英文名稱〗:Azocarmine B;Rosinduline 2B;C.I.50090
〖其他名稱〗:偶氮洋紅B;偶氮紅B
〖CAS號〗:25360-72-9
C28H17N3Na2O9S3=681.62
〖級別〗:BS
〖熔點(diǎn)〗:≥300℃
λmax:~516 nm (H2O)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅棕色粉末。易溶于吡啶,溶于水和乙二醇,極微溶于乙醇、乙酸乙酯、二甲苯、丙同、氯方、苯甲醇和橄欖油。水溶液呈藍(lán)紅色,加鹽酸有棕色沉淀。在濃硫酸中呈綠色,稀釋后有藍(lán)棕色沉淀。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色。色譜和電泳中蛋白染色。
〖保存〗:RT
偶氮胭脂紅G
〖英文名稱〗:Azocarmine G;Rosinduline GXF;Rosazine;Rosinduline;N-Phenylrosinduline sulfonic acid disodium salt;C.I.50085
〖其他名稱〗:酸性紅101;偶氮洋紅G;玫紅對氮蒽;偶氮紅G;羅星杜林;玫紅杜林
〖CAS號〗:25641-18-3
C28H18N3NaO6S2=579.58
〖級別〗:BS
〖鑒別〗:合格
λmax:523~526nm (H2O)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:帶金黃色光澤的紅色或棕色或紫色粉末。微溶于水,溶液呈藍(lán)紅色。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)組織染色。氧化還原指示劑。
〖保存〗:RT
酒石黃
〖英文名稱〗:Tartrazine;Tartar yellow;3-Carboxy-5-hydroxy-1-p-sulfophenyl-4-p-sulfophenylazopyrazole trisodium salt;4-(p-Sulfobenzeneazo)-1-p-sulfophenyl-5-hydroxypyrazole-3-carboxylic acid trisodium salt;C.I.19140

三合一 RNA 上樣液 ( 含 EB)     MDS 42recA trfA 菌種
三合一 RNA 上樣液 ( 無 EB)     *0 菌種
RNA 電泳液 ,10×    LBA4404 農(nóng)桿菌菌種
RNA 電泳液 ,10×    Oligo 快速復(fù)性液,10×
RNase A 溶液,10mg/mL    天凈沙 DNA 甲基化修飾試劑盒
溴化乙錠溶液 ,10 mg/mL    MnCl2溶液,25mM,PCR 
水飽和酚    一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒
Tris 飽和酚    柱式海洋動物 DNAout
Cre/Lox 系統(tǒng)載體系列    克必隆 eTS mRNA 擴(kuò)增試劑盒
電泳 SYBR Green I    克必隆 eTS PCR 法 cDNA 合成試劑盒
RNase 抑制劑 


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