雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理產(chǎn)品介紹:

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。
〖保存〗:RT
日落黃
〖英文名稱(chēng)〗:Sunset Yellow FCF;Food Yellow 3;C.I. 15985;FD&C Yellow No. 6;Disodium 6-hydroxy-5-[(4-sulphonatophenyl)azo]naphthalene-2-sulphonate
〖其他名稱(chēng)〗:日落黃FCF;1-對(duì)磺酸苯基偶氮-2-羥基萘-6-磺酸二鈉鹽;食用黃色6號(hào);食品黃3;食用桔黃
〖CAS號(hào)〗:2783-94-0
C16H10N2Na2O7S2=452.37
〖級(jí)別〗:AR
〖含量〗:≥87.0%
干燥減量、〖氯化物〗及〖硫酸鹽〗總量:≤13.0%
水中不溶物:≤0.2 %
〖砷〗:≤3ppm
〖鉛〗:≤10ppm
汞:≤1ppm
鎘:≤1ppm
〖鑒別〗方法:
1.本品0.1g溶于100ml水中,呈黃色澄清溶液。
2.本品微溶于乙醇,不溶于油脂,具有酸性染料的特性,能使動(dòng)物纖維著色。
3.100ml含有0.001g本品的0.02mol/L乙酸銨溶液,其zui大吸收波長(zhǎng)為482±2nm。
4.取本品水溶液做紙上層析,其主色點(diǎn)的Rf值應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理dNTP 溶液,2.5mM 柱式內(nèi)毒素清除劑
dNTP 溶液 ,10mM 無(wú)內(nèi)毒素水
dNTP 溶液 ,10mM 無(wú)內(nèi)毒素槍頭,1 mL
dNTP 溶液,100mM 凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒
dNTP 溶液,100mM RNA 溶解液
超快核酸電泳液干粉 海藻糖溶液,1.5M,PCR
超快核酸電泳液干粉 無(wú)內(nèi)毒素槍頭,200 μL
氨芐*干粉 磁珠血液 DNAout
*干粉 磁珠植物 DNAout
加 A 試劑盒 JM110 感受態(tài)細(xì)胞
,50mg/mL