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雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理

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更新時間:2017-01-19 15:09:10瀏覽次數:418次

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產品簡介

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理產品介紹:

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖保存〗:RT
日落黃
〖英文名稱〗:Sunset Yellow FCF;Food Yellow 3;C.I. 15985;FD&C Yellow No. 6;Disodium 6-hydroxy-5-[(4-sulphonatophenyl)azo]naphthalene-2-sulphonate
〖其他名稱〗:日落黃FCF;1-對磺酸苯基偶氮-2-羥基萘-6-磺酸二鈉鹽;食用黃色6號;食品黃3;食用桔黃
〖CAS號〗:2783-94-0
C16H10N2Na2O7S2=452.37
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥87.0%
干燥減量、〖氯化物〗及〖硫酸鹽〗總量:≤13.0%
水中不溶物:≤0.2 %
〖砷〗:≤3ppm
〖鉛〗:≤10ppm
汞:≤1ppm
鎘:≤1ppm
〖鑒別〗方法:
1.本品0.1g溶于100ml水中,呈黃色澄清溶液。
2.本品微溶于乙醇,不溶于油脂,具有酸性染料的特性,能使動物纖維著色。
3.100ml含有0.001g本品的0.02mol/L乙酸銨溶液,其zui大吸收波長為482±2nm。
4.取本品水溶液做紙上層析,其主色點的Rf值應與標準樣品相同。

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理dNTP 溶液,2.5mM    柱式內毒素清除劑
dNTP 溶液 ,10mM    無內毒素水
dNTP 溶液 ,10mM    無內毒素槍頭,1 mL
dNTP 溶液,100mM     凝膠法內毒素半定量試劑盒
dNTP 溶液,100mM     RNA 溶解液
超快核酸電泳液干粉     海藻糖溶液,1.5M,PCR 
超快核酸電泳液干粉     無內毒素槍頭,200 μL
氨芐*干粉    磁珠血液 DNAout
*干粉    磁珠植物 DNAout
加 A 試劑盒    JM110 感受態細胞
,50mg/mL


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