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單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法

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品       牌

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所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-01-19 15:08:19瀏覽次數(shù):449次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹:

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

紙上層析條件:
展開劑:正丁醇:無水乙醇:氨水(1%)=6:2:3
溫度:20~25℃
試液濃度:0.1g/100ml
試液用量:0.002ml
展開劑前沿上升限度:150mmm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙紅色均勻粉末或顆粒,無臭。易溶于水(6.9%,0℃)、甘油、丙二醇,微溶于乙醇、不溶于油脂。水溶液呈黃橙色。在檸檬酸、酒石酸中穩(wěn)定,還原時(shí)褪色。0.1%水溶液呈橙黃色。耐光性,耐熱性,耐酸性非常強(qiáng),耐堿性尚好,但遇堿呈紅褐色。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
麗絲胺羅丹明B
〖英文名稱〗:Lissamine rhodamine B ;Sulforhodamine B;Lissamine rhodamine B200;Lissamine rhodamin;Acid rhodamine B;Xylene red B;Acid Red 52;Sulforhodamine B monosodium salt
〖其他名稱〗:酸性羅丹明B;酸性紅52;二甲苯紅B;麗絲胺玫瑰紅B;里斯沙明玫瑰紅B200;李斯曼羅丹明B;李斯曼若丹明B;麗絲胺堿性蕊香紅B200;酸性玫瑰紅B;酸性桃紅B;柴林紅B;磺化羅丹明B;奇通紅S;硫羅丹明B
〖CAS號(hào)〗:3520-42-1
C27H29N2NaO7S2=580.65

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法加 T 試劑盒    一站式磁珠法動(dòng)物 mRNAout
DNA 粘轉(zhuǎn)平試劑盒    無包被磁珠
非酶 DNA 清除劑    硅基磁珠
柱式 DNA 膠回收試劑盒    氨基磁珠
柱式 DNA 膠回收試劑盒    羧基磁珠
硫酸*干粉    環(huán)氧基磁珠
非酶多糖清除劑 (RNA )    醛基磁珠
柱式質(zhì)粒 DNAout    基磁珠 
柱式質(zhì)粒 DNAout    殼聚糖磁珠
氨芐*溶液 ,50mg/mL    鏈霉親和素磁珠
*溶液 ,25mg/mL    蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2
硫酸*溶液 


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