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單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 （Tth）50 次實(shí)驗(yàn)方法

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品       牌

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所  在  地上海市

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更新時(shí)間：2017-01-19 15:08:19瀏覽次數(shù)：449次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 （Tth）50 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

紙上層析條件：
展開劑：正丁醇：無水乙醇：氨水（1%）=6：2：3
溫度：20～25℃
試液濃度：0.1g/100ml
試液用量：0.002ml
展開劑前沿上升限度：150mmm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙紅色均勻粉末或顆粒，無臭。易溶于水（6.9%，0℃）、甘油、丙二醇，微溶于乙醇、不溶于油脂。水溶液呈黃橙色。在檸檬酸、酒石酸中穩(wěn)定，還原時(shí)褪色。0.1%水溶液呈橙黃色。耐光性，耐熱性，耐酸性非常強(qiáng)，耐堿性尚好，但遇堿呈紅褐色。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
麗絲胺羅丹明B
〖英文名稱〗：Lissamine rhodamine B ；Sulforhodamine B；Lissamine rhodamine B200；Lissamine rhodamin；Acid rhodamine B；Xylene red B；Acid Red 52；Sulforhodamine B monosodium salt
〖其他名稱〗：酸性羅丹明B；酸性紅52；二甲苯紅B；麗絲胺玫瑰紅B；里斯沙明玫瑰紅B200；李斯曼羅丹明B；李斯曼若丹明B；麗絲胺堿性蕊香紅B200；酸性玫瑰紅B；酸性桃紅B；柴林紅B；磺化羅丹明B；奇通紅S；硫羅丹明B
〖CAS號(hào)〗：3520-42-1
C27H29N2NaO7S2=580.65

單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次實(shí)驗(yàn)方法加 T 試劑盒    一站式磁珠法動(dòng)物 mRNAout
DNA 粘轉(zhuǎn)平試劑盒    無包被磁珠
非酶 DNA 清除劑    硅基磁珠
柱式 DNA 膠回收試劑盒    氨基磁珠
柱式 DNA 膠回收試劑盒    羧基磁珠
硫酸*干粉    環(huán)氧基磁珠
非酶多糖清除劑 (RNA )    醛基磁珠
柱式質(zhì)粒 DNAout    基磁珠 
柱式質(zhì)粒 DNAout    殼聚糖磁珠
氨芐*溶液 ,50mg/mL    鏈霉親和素磁珠
*溶液 ,25mg/mL    蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2
硫酸*溶液 


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