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兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 15:07:13瀏覽次數:384次

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產品簡介

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟產品介紹:

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖級別〗:BS
生物染色試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:褐色或綠色至棕色至紫色或栗色粉末,溶于水。熒光為桔紅色。性質穩定,可*〖保存〗。zui大吸收波長570nm,zui大發射波長為600nm。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)應用于熒光染色技術
〖保存〗:RT
酚番紅花紅
〖英文名稱〗:Phenosafranine;Safranine B extra;3,7-Diamino-5-phenylphenazinium chloride;C.I. 50200
〖其他名稱〗:酚藏紅花;酚藏花紅;3,7-二氨基-5-苯基吩嗪翁〖氯化物〗;奎諾二甲基酯
〖CAS號〗:81-93-6
C18H15C1N4=322.79
〖級別〗:IND
〖熔點〗:≥300℃
PH變色域:0.3(紅)~1.0(藍)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:綠色或棕紅色具光澤針狀結晶。易溶于水,溶于乙醇,其水溶液和乙醇溶液為紫紅色并呈現綠黃色熒光。zui大吸收波長 約530nm。有刺激性。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色。吸附指示劑,測定〖氯化物〗和溴化物。生化研究用氧化還原指示劑。
〖保存〗:RT
磺酰羅丹明B

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次實驗步驟*溶液 ,50mg/mL    哺乳動物蛋白酶抑制劑
*溶液 ,50mg/mL    植物蛋白酶抑制劑
*干粉    酵母蛋白酶抑制劑
硫酸*干粉    His 標簽蛋白蛋白酶抑制劑
真菌 DNAout    組織培養基蛋白酶抑制劑
真菌 RNAout    EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白
真菌 RNAout    木瓜蛋白酶抑制劑溶液,0.5 mg/mL
柱式血液 DNAout    抗*Ⅲ,10mg/mL
柱式血液 DNAout    APMSF 溶液,10mg/mL
RNase-free EDTA 溶液 ,0.5M,pH 8.0    抑氨肽酶,5mg/mL
RNase A 溶液,2mg/mL    鈣蛋白酶抑制劑Ⅰ溶液,10mg/mL
RNase-free 75% 乙醇    二氯異香豆素溶液,10mg/mL
超快非醇核酸沉淀劑    E-64 蛋白酶抑制劑,20mg/mL
超快非醇核酸沉淀劑    水蛭素溶液,2mg/mL
 標簽單抗


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