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6nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 15:01:38瀏覽次數:411次

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產品簡介

6nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

6nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗步驟產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

6nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
6nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗步驟按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

C15H17BrN4O=349.23
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥80.0% 
鈾靈敏性實驗:合格 
乙醇溶解實驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:暗橙紅色結晶或粉末。能溶于乙醇、丙同和乙酸,不溶于水。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)顯色劑,光度法測定Cd,〖鎳〗Ni等。 
〖保存〗:RT
4-羥基偶氮苯
〖英文名稱〗:4-Phenylazophenol;4-Hydroxy-azo-benzene; Solvent yellow 7;C.I. 11800
〖其他名稱〗:對羥基偶氮苯;對苯偶氮酚;4-苯基偶氮*;溶劑黃7;4-N-苯基苯酰胺
〖CAS號〗:1689-82-3

6nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗步驟一站式 RNA 電泳套裝    小鼠 RFP 標簽單抗
MMLV 逆轉錄酶    小鼠 RFP 標簽單抗
MMLV 逆轉錄酶    小鼠抗 VSV-G 標簽單抗
cDNA *鏈合成試劑盒    小鼠抗 T7 標簽單抗
cDNA *鏈合成試劑盒    小鼠抗 T7 標簽單抗
質粒(載體)列表    小鼠抗 CBP 標簽單抗
質粒 ( 載體 ) 系列產品    小鼠抗 HSV 標簽單抗
非凍型血液 DNA 保存液    小鼠抗 E2 標簽單抗
非凍型血液 DNA 保存液    小鼠抗 S1 標簽單抗
硅膠膜離心吸附柱系列 ( 小提 )    小鼠抗 Tag-100 標簽蛋白單抗
非酶 RNA 清除劑 2.0    小鼠抗 HPC4 標簽蛋白單抗
電泳耐熱型 SYBR 染料    小鼠抗 SUMO 標簽蛋白單抗
    核酸內切酶 VIII


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