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一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次原理

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更新時間:2017-01-19 14:57:51瀏覽次數:472次

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產品簡介

一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

產品介紹:

產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖保存〗:RT
〖鋅〗試劑
〖英文名稱〗:Zincon;2-Carboxy-2′-hydroxy-5′-sulfoformazylbenzene;1-(2′-Hydroxy-5′-sulfophenyl)-3-phenyl-5-(2″-carboxyphenyl)formazan;5-(o-Carboxyphenyl)-1-(2-hydroxy-5-sulfophenyl)-3-phenyl formazan
〖其他名稱〗: 5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽;2-羧基-2′-氫基-5′-磺苯甲酸單鈉鹽;鄰[2-(2-羥基-5-磺基苯偶氮)亞芐基]肼基苯甲酸單鈉鹽;〖鋅〗單鈉鹽
〖CAS號〗:62625-22-3或56484-13-0
C20H15N4NaO6S=462.41
〖級別〗:AR
對〖鋅〗靈敏度試驗:合格
堿溶解試驗:合格
絡合試驗:合格
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計):≤20.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紫棕色結晶性粉末。溶于乙醇和堿,溶于氫氧呈紅色,不溶于水。遇〖鋅〗生成藍色化合物,稀時為溶液,濃時為深藍色沉淀。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)比色法測定〖鋅〗和銅。直接測定〖鋅〗的絡合指示劑,并可測定銅和汞。作為絡合指示劑間接滴定鈣、〖鋅〗、銅、〖鎳〗、鈷、〖鐵〗、錳、鎘、〖鉛〗、鈰和銦
〖保存〗:RT
磷鎢酸
〖英文名稱〗:Phosphotungstic acid hydrate;Tungstophosphoric acid hydrate;Dodecatungstophosphoric acid hydrate

石蠟包埋組織 DNAout    抗干擾 Taq DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標準 (50-500 bp)    AMV cDNA *鏈合成試劑盒
DNA 電泳分子量標準 (100-600 bp)    一步式 RT-PCR Mix 
DNA 電泳分子量標準 200-1500 bp)    Bst DNA 聚合酶,全長
DNA 電泳分子量標準 (100-200 bp)    9° Nm DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標準 (200-5000 bp)    Therminator DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標準 (250-1500 bp)    Bsu DNA 聚合酶,大片段
DNA 電泳分子量標準 (100-1500 bp)    Therminator γ DNA 聚合酶
DNA 電泳分子量標準 (100-5000 bp)    T7 DNA 聚合酶 ( 未修飾 )
DNA 電泳分子量標準 (300-10000 bp)    Poly(U) 聚合酶
糞便 DNAout    Taq DNA 連接酶
糞便 DNAout    T4 RNA 連接酶 1
分子量標準 (


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