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上海邦景實業(yè)有限公司
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產(chǎn)品型號
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所 在 地上海市
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更新時間：2017-01-19 14:56:27瀏覽次數(shù)：398次
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cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次實驗方法運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次實驗方法產(chǎn)品介紹：
cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次實驗方法產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。
〖其他名稱〗：磷鎢酸水合物；鎢磷酸水合物；12-鎢磷酸水合物
〖CAS號〗：12501-23-4
H3[P(W3O10)4] · xH2O=2880.05 (anhydrous basis)
〖級別〗：AR
澄清度試驗：合格
〖重金屬〗(以Pb計)：≤0.002%
〖氯化物〗：≤0.03%
〖銨鹽〗：≤0.02%
〖硫酸鹽〗：≤0.02%
〖鐵〗：≤0.002%
水不溶物：≤0.02%
鈉：≤0.02%
鈣：≤0.02%
DNA 快速連接試劑盒 9° N DNA 連接酶
DNA 快速連接試劑盒 核酸外切酶 T
土壤腐殖酸清除劑 Lambda 核酸外切酶
miRNA PAGE 膠回收試劑盒 RecJf 核酸外切酶
miRNA 電泳分子量標準 T7 核酸外切酶
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝 人源脫嘌呤 / 脫嘧啶 (AP) 核酸內(nèi)切酶激酶
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.0 T7 核酸內(nèi)切酶 I
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6× Tma 核酸內(nèi)切酶 III
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6× 核酸內(nèi)切酶 IV
柱式病毒 DNAout 核酸內(nèi)切酶 III (Nth)
分枝桿菌 DNAout 核酸內(nèi)切酶 V
柱式分枝桿菌 DNAout T4 核酸內(nèi)切酶 V
預(yù)染蛋白質(zhì)電泳
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