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AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理

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更新時間:2017-01-19 14:53:02瀏覽次數:493次

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產品簡介

AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

  AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
  AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖干燥失重〗:≤1.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:金黃色扇狀結晶或結晶性粉末。溶于約40份水,易溶于熱水,微溶于甲醇和乙醇?!既埸c〗>300℃。zui大吸收波長372nm。
〖用途〗:生化研究。光度測定鈷和鉀。檢定銀、鋇、鈣、鈷、〖鐵〗、〖鎳〗、〖鉛〗。
〖保存〗:RT,避光
雙硫腙
〖英文名稱〗:Dithizone;Diphenylthiocarbazone;1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone
〖其他名稱〗:苯肼硫代羰偶氮苯;打薩宗;二苯磺卡貝松;〖鉛〗試劑;苯肼硫碳酰偶氮苯;二苯基硫代卡巴腙;二苯基硫巴腙;二苯硫代偶氮碳酰肼;二苯硫代縮(對稱)二氨基脲;二苯基硫卡巴腙;二苯基硫代二氨基脲;2-苯基酰肼苯基二氮烯硫代羧酸;打薩腙;二苯硫代卡貝松;二苯硫卡巴腙
〖CAS號〗:60-10-6
C13H12N4S=256.33
〖級別〗:AR
分光有效〖含量〗:≥75.0%
吸收比率:≥1.55
靈敏度試驗:合格
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計):≤0.1%
干燥失量:≤5.0%

柱式動物 RNAout    通用 miRNA 克隆接頭
柱式動物 RNAout    m7G(5´)ppp(5´)G 帽結構類似物
柱式血液 RNAout    m7G(5´)ppp(5´)A 帽結構類似物
柱式植物 RNAout    G(5´)ppp(5´)A 帽結構類似物
柱式凝固血液 DNAout    G(5´)ppp(5´)G 帽結構類似物
柱式土壤 DNAout    3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽結構類似物
柱式動物 DNAout    RNase 抑制劑 ( 小鼠源 )
RNA 洗脫液    p19siRNA 結合蛋白 
RNA 洗脫液    p19miRNA 檢測試劑盒 
一管式病毒 DNA-RNAout    ATP 發光法細胞活力檢測試劑盒
柱式糞便 DNAout    ADP/ATP 發光法細胞活力檢測試劑盒
    ROX 參考染料


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