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ROX 參考染料200μL原理

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更新時間:2017-01-19 14:44:49瀏覽次數:630次

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產品簡介

ROX 參考染料200μL原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

ROX 參考染料200μL原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
ROX 參考染料200μL原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

ROX 參考染料200μL原理產品介紹:

ROX 參考染料200μL原理產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖其他名稱〗:5-二甲氨基-1-萘磺酰氯;丹酰氯;1-二甲氨基萘-5-磺酰氯;5-二甲氨基萘-1-磺酰氯;氯化-1-二甲氨基萘-5-磺酰;5-二甲基氨基-1-萘磺酰氯
〖CAS號〗:605-65-2
C12H12ClNO2S=269.75
〖級別〗:BR
〖含量〗: ≥98.0%
〖熔點〗:72~74℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:黃色或橙色結晶。對濕敏感。溶于丙同、吡啶、苯和二氧六環,不溶于水,極緩慢地被水分解。可在氯化鈣干燥器中穩定數月。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酚類和蛋白質、氨基酸的熒光標記。色譜試劑
〖保存〗:-20℃,避光
核固紅
〖英文名稱〗:Nuclear fast red;Calcin red;Kernechtrot;1-Amino-2,4-dihydroxyanthraquinone-3-sulfonic acid sodium salt ;C.I. 60760
〖其他名稱〗:細胞核堅牢紅;鈣紅;核快紅;乙二縮雙鄰氮基酚
〖CAS號〗:6409-77-4
C14H8NNaO7S=357.27

ROX 參考染料200μL原理mRNA 提取試劑盒    柱式葡萄球菌 RNAout
大提柱式動物 RNAout    柱式分枝桿菌 RNAout
大提柱式血液 RNAout    白色念珠菌 RNAout
大提柱式植物 RNAout    柱式白色念珠菌 RNAout
大提柱式真菌 RNAout    LB 平板培養基 無抗
大提柱式細菌 RNAout    LB 平板培養基 (Amp 抗性 )
一站式大提柱式 miRNAout    LB 平板培養基 (Kan 抗性 )
一站式動物 mRNAout    LB 平板培養基 (Tet 抗性 )
IPTG 溶液,200mg/mL    Protein A 磁珠
X-Gal 溶液,20mg/mL    Protein G 磁珠
蛋白酶 K 溶液,10mg/mL    T4 RNA 連接酶 2( 雙鏈 RNA 連接酶 )
大提柱式質粒 DNAout     T4 RNA 連接酶 2( 截短型 )
大提柱式質粒 DNAout     T4 RNA 連接酶 2( 截短型 K227Q)
超雜交液 A(


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