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即用型熒光定量 PCR 試劑盒600 次實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 14:42:29瀏覽次數:624次

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產品簡介

即用型熒光定量 PCR 試劑盒600 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

即用型熒光定量 PCR 試劑盒600 次實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
即用型熒光定量 PCR 試劑盒600 次實驗步驟產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

鈣指示劑
〖英文名稱〗:Calconcarboxylic acid;3-Hydroxy-4-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)naphthalene-2-carboxylic acid
〖其他名稱〗:鈣羧酸指示劑;鈣紅;鈣羧酸鈉;鈣羧酸;鈣試劑羧酸鈉;3-羥基-4-[(2-羥基-4-磺基-1-萘基)偶氮]-2-萘羧酸;2-羥基-1-(2-羥基-4-磺基-1-萘基偶氮)-3-萘甲酸;鈣試劑羧酸;3-羥基-4-(2-羥基-4-磺基-1-萘基偶氮)萘-2-羧酸;1-(2-羥基-4-磺基-1-萘基偶氮)-2-羥基-3-萘甲酸
〖CAS號〗:3737-95-9
C21H14N2O7S=438.41
〖級別〗:IND
稀氫氧溶液溶解試驗:合格
絡合試驗:合格
滴定試驗:合格
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計):≤0.3%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:棕色至色結晶或褐色粉末。易溶于堿液和氨水,微溶于水。在pH不大于10時呈紅色,pH13~14間為淺藍色,能和鈣形成紅色螯合物。〖熔點〗300℃。zui大吸收波長 560(366)nm。有刺激性。商品也有制成鈉鹽的,易溶于水,水溶液和乙醇溶液均不穩定。常與100倍的氯混勻后使用

大提柱式動物 DNAout    一站式 MBP 標簽蛋白純化套裝
大提柱式血液 DNAout    SUMO 蛋白酶
大提柱式植物 DNAout    TEV 蛋白酶
大提柱式真菌 DNAout    人玻連蛋白
大提柱式細菌 DNAout    葡激酶
大提柱式細菌 DNAout( 含* )    PreScissiom 蛋白酶
大提柱式土壤 DNAout    可逆性銅染試劑盒
液體樣品 RNAout    可逆性鋅染試劑盒
液體樣品 RNAout    糖蛋白 PAGE 染液
微量樣品*    脂蛋白 PAGE 染液
微量樣品*    一站式乙酸 - 尿素 PAGE 電泳套裝
一步法96 孔板單菌落質粒DNAout( 離心法)    免疫蛋白清除劑
一步法96 孔板單菌落質粒DNAout( 離心法)    磷酸化蛋白純化試劑盒
RNase-free Tris HCl,1M,pH 9.0    糖蛋白蛋白純化試劑盒
套裝    


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